巨噬細(xì)胞刺激巨噬細(xì)胞做它該做的清道夫工作，即可清除老鼠大腦中的腦斑。腦斑是蛋白質(zhì)的堆積物，是老年失智癥的病征之一。巨噬細(xì)胞是扮演清道夫角色的免疫細(xì)胞，巨噬細(xì)胞中的合成物轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β（TGF-beta），具有抑制巨噬細(xì)胞活動(dòng)的功能，以免產(chǎn)生失控反應(yīng)。 老年失智癥的大腦，均有轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β濃度升高的現(xiàn)象?？茖W(xué)家認(rèn)為轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β濃度偏高，是因老年失智癥的腦斑會(huì)引起發(fā)炎，而轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β增加，是為減輕發(fā)炎，但新的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，情況并非如此。
科學(xué)家以基因改造的方式，讓老鼠的轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β，無(wú)法對(duì)在外周循環(huán)中的巨噬細(xì)胞發(fā)出訊號(hào)?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，如此做后，外周循環(huán)的巨噬細(xì)胞會(huì)大舉進(jìn)入老年失智癥老鼠的大腦中。
康乃狄克州耶魯大學(xué)醫(yī)學(xué)院陶恩說(shuō)，外周循環(huán)巨噬細(xì)胞滲透大腦的動(dòng)作，即是老年失智癥老鼠的療方。這項(xiàng)結(jié)果大出陶恩意料。之前科學(xué)家的論點(diǎn)是，提高大腦的免疫反應(yīng)可能加重發(fā)炎，因而對(duì)病情有害。實(shí)驗(yàn)中，基改老鼠的腦斑有九成消失無(wú)蹤，而且老鼠的官能反應(yīng)也獲得改善，例如走迷宮不再那么容易迷失方向。陶恩說(shuō)，若科學(xué)家能以藥物，封阻人體外周循環(huán)中的轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β，應(yīng)該也能達(dá)到動(dòng)員外周巨噬細(xì)胞進(jìn)入大腦，清除老人斑的目的。陶恩的研究團(tuán)隊(duì)已將研究重心，改為尋找可封阻轉(zhuǎn)型生長(zhǎng)因子β的藥物。
巨噬細(xì)胞（Macrophages）能夠吞沒(méi)、破壞受損傷組織，有助于啟動(dòng)康復(fù)過(guò)程。雖然它們?cè)趽p傷位點(diǎn)發(fā)揮關(guān)鍵作用，但一旦任務(wù)完成，就需要盡快撤離，結(jié)束炎癥反應(yīng)，為再生過(guò)程開(kāi)路。繼續(xù)存在的巨噬細(xì)胞不利于組織恢復(fù)。巨噬細(xì)胞盡管研究人員對(duì)于啟動(dòng)巨噬細(xì)胞的分子機(jī)制研究的比較透徹，但關(guān)于其退出損傷位點(diǎn)的過(guò)程還了解甚少。研究人員鑒別出一清除外周神經(jīng)損傷位點(diǎn)巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對(duì)弄清脊髓損傷、中風(fēng)和多發(fā)性硬化中相似的分子機(jī)制提供了重要線索。已知Nogo細(xì)胞受體家族與神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)，SamuelDavid等觀測(cè)Nogo家族成員NgR1的作用。NgR1類(lèi)受體是位于細(xì)胞膜上的蛋白開(kāi)關(guān)，受到特異化學(xué)信號(hào)或配體刺激后，誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)。
破壞大鼠、小鼠的大腿坐骨神經(jīng)，觀察NgR1在修復(fù)過(guò)程中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞到達(dá)損傷位點(diǎn)后，細(xì)胞表面會(huì)表達(dá)NgR1。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，受損神經(jīng)合成髓磷脂時(shí)，NgR1不僅阻止巨噬細(xì)胞與髓磷脂結(jié)合，而且直接排斥正在形成過(guò)程中的髓磷脂，若抑制髓磷脂再生，巨噬細(xì)胞會(huì)停留在損傷位點(diǎn)周?chē)?。最終，研究人員在髓磷脂上鑒別出特異激發(fā)排斥反應(yīng)的分子?？蓱?yīng)用于外周神經(jīng)以外的神經(jīng)（中樞神經(jīng)），他們發(fā)現(xiàn)中風(fēng)、多發(fā)性硬化和脊髓損傷過(guò)程中激活的巨噬細(xì)胞，表面都會(huì)表達(dá)NgR1。
巨噬細(xì)胞也建有無(wú)限細(xì)胞系，大多來(lái)自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來(lái)源來(lái)獲取細(xì)胞，以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用，其法如下：
1、實(shí)驗(yàn)前三天，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內(nèi)）。
巨噬細(xì)胞 2、引頸殺死動(dòng)物，手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3～5秒。
3、置動(dòng)物于解剖臺(tái)上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開(kāi)皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。
4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同時(shí)從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng)。
5、用針頭輕輕挑起腹壁，使動(dòng)物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。
6、小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g4℃離心10分鐘，去上清，加10mlEagle培養(yǎng)基。
7、計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生20～30×105細(xì)胞，其中90%為巨噬細(xì)胞。
8、為獲取3×105帖附細(xì)胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml。 9、為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時(shí)后，去除培養(yǎng)液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃CO2溫箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)是無(wú)菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔，空氣清新，干燥和無(wú)煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無(wú)菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。
(1)超凈工作臺(tái)：也稱(chēng)凈化工作臺(tái)，側(cè)流式，直流式和外流式三大類(lèi)。
(2)無(wú)菌操作間：一般由衣間，緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱，離心機(jī)，倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱，冷藏器及消毒好的無(wú)菌物品等。
(3)操作間：普通培養(yǎng)箱，離心機(jī)，水浴鍋，定時(shí)鐘，普通天平及日常分析處理物
(4)洗刷消毒間：烤箱，消毒鍋，蒸餾水處理器及酸缸等。
(5)分析間：顯微鏡，計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等。
常用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿等。常準(zhǔn)備量是使用量的三倍。器皿應(yīng)選擇透明度好，無(wú)毒，利于細(xì)胞粘附和生長(zhǎng)的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面幾種。巨噬細(xì)胞(1)液體儲(chǔ)存瓶：用于儲(chǔ)存各種配制好的培養(yǎng)液，血清等液體，常用規(guī)格有500ml，250ml，100ml等幾種。
(2)培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類(lèi)要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶?jī)?nèi)任何部位，規(guī)格有200ml，100ml，50ml，25ml，10ml等幾種。
(3)培養(yǎng)皿：用于開(kāi)放式培養(yǎng)及其它用途。分直徑30mm，60mm，120mm等幾種。
(4)吸管：常用的有長(zhǎng)吸管和短吸管兩類(lèi)，長(zhǎng)吸管也稱(chēng)刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱(chēng)改良吸管，刻度吸管用于移動(dòng)液體。常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。
(5)離心管：離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用最廣泛的器皿，根據(jù)用途不同形態(tài)各樣，常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類(lèi)。前者分別為50ml，30ml，15ml；后者則多為10ml和5ml。
(6)其它：如三角燒瓶，燒杯，量筒，漏斗，注射器等。
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)溫度要求也不同。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至
巨噬細(xì)胞 死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng)，溫度上升不超過(guò)39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。相反，溫度不低于0℃時(shí)，對(duì)細(xì)胞代謝雖有影響，但并無(wú)傷害作用;把細(xì)胞放入25-35℃時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng)，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時(shí)后，再回到37℃培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長(zhǎng)。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長(zhǎng)期保存。
氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需用的各種成分。開(kāi)放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長(zhǎng)，如成纖維細(xì)胞最適合pH是7.4-7.6。每種細(xì)胞都有其最適pH值。[1]
巨噬細(xì)胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是集細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、激素和酶特性于一身的多效能蛋白分子。MIF高度保守，在多種急慢性炎癥性疾病中發(fā)揮多種巨噬細(xì)胞免疫功能。
MIF參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病和發(fā)展，即斑塊形成、動(dòng)脈損傷后重建、動(dòng)脈瘤形成、心肌梗死、缺血再灌注損傷等機(jī)制。此外，其他形式的心肌功能不全和炎癥與MIF參與血管再生有關(guān)。從特征和功能方面，MIF顯著不同于其他細(xì)胞因子，是提高動(dòng)脈粥樣硬化治療的最主要的靶向。
利用MIF，作為心血管疾病治療靶向和診斷標(biāo)志物。呼吸內(nèi)科、西安市中心醫(yī)院和陜西省綏德縣醫(yī)院的研究人員共同完成的研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可以抑制肺泡巨噬細(xì)胞過(guò)度釋放腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6），為慢性氣道炎癥的治療帶來(lái)了新的希望。
在呼吸系統(tǒng)疾病中，氣道炎癥的慢性化以及氣道的重塑是多種肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、支氣管哮喘等的共同病理生理特征，該特征是由多種炎癥細(xì)胞及細(xì)胞因子相互作用所致的氣道病變。在病理生理過(guò)程中巨噬細(xì)胞起著極為重要的作用，巨噬細(xì)胞在細(xì)菌產(chǎn)物、煙霧等有害成分如甲醛、NO2及其他一些氧化產(chǎn)物剌激下，向肺組織遷移并釋放多種細(xì)胞因子如TNF-α、IL-8、IL-6、IL-1等，反過(guò)來(lái)這些細(xì)胞因子又可趨化中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等向肺組織遷移，這些細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子是引起氣道炎癥慢性化和氣道嚴(yán)重?fù)p傷的重要因素。如果能有效地抑制細(xì)胞和炎癥細(xì)胞因子的釋放，
巨噬細(xì)胞就會(huì)降低及減輕氣道的損傷。為探討白藜蘆醇（Res）對(duì)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子IL-6、TNF-α的影響，研究人員經(jīng)從小鼠支氣管肺泡灌洗中獲得肺泡巨噬細(xì)胞，分5組進(jìn)行培養(yǎng)，各組在培養(yǎng)4、6、12、24小時(shí)提取上清液，應(yīng)用ELISA法測(cè)定上清液中IL-6、TNF-α含量。
在LPS刺激下IL-6于12小時(shí)達(dá)釋放高峰，在高峰期隨著白藜蘆醇濃度的逐步加大，IL-6的含量相應(yīng)逐漸降低，E組IL-6含量明顯低于只有內(nèi)毒素刺激的A組（P<0.05）。同樣在LPS刺激下TNF-α于6小時(shí)達(dá)釋放高峰，在高峰期隨著白藜蘆醇濃度的逐步加大，TNF-α含量也相應(yīng)逐漸降低，而C組、D組、E組TNF-α含量明顯低于A組（P<0.05）。白藜蘆醇對(duì)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞過(guò)度釋放炎癥細(xì)胞因子IL-6、TNF-α具有明顯抑制作用，這為氣道慢性炎癥的治療提供了理論依據(jù)。
1、取6周左右的小鼠（或600克左右的豚鼠，或3公斤左右的家兔），剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml（豚鼠20ml，家兔200ml）無(wú)菌的液體石蠟或巰基乙酸肉湯或4%淀粉肉湯
巨噬細(xì)胞 。3～4天以后收集腹腔細(xì)胞。2、如要收集腹腔靜置巨噬細(xì)胞，不注射刺激物，直接從一步開(kāi)始。放血處死動(dòng)物，以減少腹腔中的紅細(xì)胞。消毒腹部，沿腹中線注入3～4ml（豚鼠20～40ml，家兔50～70ml）冰中預(yù)冷的無(wú)菌PBS-H（含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS）。輕輕按摩腹部5分鐘。
3、以下均無(wú)菌操作。剪開(kāi)腹壁，用吸管吸出滲出液，再用同樣容量的預(yù)冷PBS-H沖洗腹腔2～3次。合并滲出液于離心管中，4℃離心250×g10分鐘，去上清液。
4、用預(yù)冷的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，每次4℃離心250×g10分鐘，去上清液。用預(yù)冷的適量RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞并決定細(xì)胞活力。
家兔肺泡巨噬細(xì)胞的分離和純化
1、取2～3公斤重的家兔，耳緣靜脈注射10ml空氣處死動(dòng)物或注射2ml（含130mg）戊巴比妥麻醉動(dòng)物。仰臥固定，消毒胸部，剪開(kāi)胸壁。以下過(guò)程注意無(wú)菌操作。小心從環(huán)狀軟骨下方剪下氣管，分離心臟和血管，取出肺，剪去脂肪和結(jié)締組織。用無(wú)菌紗布小心擦凈肺表面，稱(chēng)重。
2、分離肺泡巨噬細(xì)胞：用夾子夾住氣管，使肺懸空。向氣管中注射40ml無(wú)菌的冷生理鹽水，讓生理鹽水進(jìn)入全部肺泡。用鑷子提起氣管，從夾子下面剪斷氣管，將肺中的液體倒入離心管中。再用同樣方法，用40ml無(wú)菌冷生理鹽水沖洗肺泡，合并浸出液，置4℃。
3、分離肺組織中的巨噬細(xì)胞：取出肺泡巨噬細(xì)胞后，剪去氣管，將肺組織放在
巨噬細(xì)胞 有冷RPMI-1640培養(yǎng)液的平皿中。平皿置冰上，用吸滿冷RPMI-1640培養(yǎng)液的20ml注射器接23號(hào)針頭，一邊灌注一邊用針頭梳離肺組織，直到肺組織與支氣管樹(shù)全部分離。使肺組織通過(guò)00目的鋼絲網(wǎng)，分離單細(xì)胞。4、以下過(guò)程均在4℃中進(jìn)行。分別處理肺泡巨噬細(xì)胞和肺組織中的巨噬細(xì)胞：離心200×g10分鐘，去上清液。輕彈試管，懸浮細(xì)胞，加入10ml低滲液（20mmol/LTris,0.75%氯化銨，pH7.4），37℃處理3～5分鐘，溶解紅細(xì)胞。紅細(xì)胞通常分別占肺泡巨噬細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞的1%和10%。也可以不用低滲處理，直接在淋巴細(xì)胞分離液上分離巨噬細(xì)胞。
5、離心200×g10分鐘，去上清液。用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次。將細(xì)胞懸液加在淋巴細(xì)胞分離液（比重1.077）上，離心400×g20分鐘，收集交界面的巨噬細(xì)胞。棄去沉淀的死細(xì)胞和紅細(xì)胞。
6、用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌巨噬細(xì)胞2次。臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力和細(xì)胞數(shù)，將細(xì)胞配成所需濃度。此時(shí)巨噬細(xì)胞活力可達(dá)90%以上，巨噬細(xì)胞占全部細(xì)胞的90%以上。
1、用外科方法無(wú)菌摘取小鼠脾臟和胸腺，置于盛有預(yù)冷RPMI-1640培養(yǎng)液（含1%小牛血清）的平皿中，剪去結(jié)締組織和脂肪。用無(wú)菌注射器芯將脾臟或胸腺擠壓通過(guò)200目的鋼絲網(wǎng)，獲得單個(gè)細(xì)胞。
2、離心200×g10分鐘，去上清液。用含1%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成約1×108～5×108/ml。[2]
巨噬細(xì)胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是集細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、激素和酶特性于一身的多效能蛋白分子。MIF高度保守，在多種急慢性炎癥性疾病中發(fā)揮多種巨噬細(xì)胞免疫功能。
MIF參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病和發(fā)展，即斑塊形成、動(dòng)脈損傷后重建、動(dòng)脈瘤形成、心肌梗死、缺血再灌注損傷等機(jī)制。此外，其他形式的心肌功能不全和炎癥與MIF參與血管再生有關(guān)。從特征和功能方面，MIF顯著不同于其他細(xì)胞因子，是提高動(dòng)脈粥樣硬化治療的最主要的靶向。
利用MIF，作為心血管疾病治療靶向和診斷標(biāo)志物。呼吸內(nèi)科、西安市中心醫(yī)院和陜西省綏德縣醫(yī)院的研究人員共同完成的研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可以抑制肺泡巨噬細(xì)胞過(guò)度釋放腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6），為慢性氣道炎癥的治療帶來(lái)了新的希望。
在呼吸系統(tǒng)疾病中，氣道炎癥的慢性化以及氣道的重塑是多種肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、支氣管哮喘等的共同病理生理特征，該特征是由多種炎癥細(xì)胞及細(xì)胞因子相互作用所致的氣道病變。在病理生理過(guò)程中巨噬細(xì)胞起著極為重要的作用，巨噬細(xì)胞在細(xì)菌產(chǎn)物、煙霧等有害成分如甲醛、NO2及其他一些氧化產(chǎn)物剌激下，向肺組織遷移并釋放多種細(xì)胞因子如TNF-α、IL-8、IL-6、IL-1等，反過(guò)來(lái)這些細(xì)胞因子又可趨化中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等向肺組織遷移，這些細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子是引起氣道炎癥慢性化和氣道嚴(yán)重?fù)p傷的重要因素。如果能有效地抑制細(xì)胞和炎癥細(xì)胞因子的釋放，
巨噬細(xì)胞 就會(huì)降低及減輕氣道的損傷。為探討白藜蘆醇（Res）對(duì)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子IL-6、TNF-α的影響，研究人員經(jīng)從小鼠支氣管肺泡灌洗中獲得肺泡巨噬細(xì)胞，分5組進(jìn)行培養(yǎng)，各組在培養(yǎng)4、6、12、24小時(shí)提取上清液，應(yīng)用ELISA法測(cè)定上清液中IL-6、TNF-α含量。
在LPS刺激下IL-6于12小時(shí)達(dá)釋放高峰，在高峰期隨著白藜蘆醇濃度的逐步加大，IL-6的含量相應(yīng)逐漸降低，E組IL-6含量明顯低于只有內(nèi)毒素刺激的A組（P<0.05）。同樣在LPS刺激下TNF-α于6小時(shí)達(dá)釋放高峰，在高峰期隨著白藜蘆醇濃度的逐步加大，TNF-α含量也相應(yīng)逐漸降低，而C組、D組、E組TNF-α含量明顯低于A組（P<0.05）。白藜蘆醇對(duì)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞過(guò)度釋放炎癥細(xì)胞因子IL-6、TNF-α具有明顯抑制作用，這為氣道慢性炎癥的治療提供了理論依據(jù)。
在機(jī)體創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中，巨噬細(xì)胞主要有兩方面的作用。
其一，一旦機(jī)體創(chuàng)傷活動(dòng)開(kāi)始,巨噬細(xì)胞就能大量分泌多種生物活性物質(zhì)以及多種酶類(lèi)物質(zhì)，其中生物活性物質(zhì)又稱(chēng)巨噬細(xì)胞源性生物因子，包括多肽轉(zhuǎn)換生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子以及一氧化氮等；酶類(lèi)物質(zhì)主要包括膠原酶、彈性蛋白酶、纖溶酶原激活劑等；些生物活性物質(zhì)直接引導(dǎo)著機(jī)體修復(fù)的整進(jìn)程。
其二，巨噬細(xì)胞作為炎癥階段的主要吞噬細(xì)胞，負(fù)責(zé)清除機(jī)體損傷處組織和細(xì)胞的壞死碎片以及病原體等，這些物質(zhì)對(duì)創(chuàng)傷愈合過(guò)程都有重要的調(diào)控作用。因此，研究創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中巨噬細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子的種類(lèi)和含量在創(chuàng)傷后不同時(shí)間的變化規(guī)律，將可能從分子水平和細(xì)胞水平上提供一些與損傷時(shí)間相關(guān)的標(biāo)志性變化或依據(jù)；而文獻(xiàn)報(bào)道巨噬細(xì)胞吞噬物的變化亦具有與時(shí)間相關(guān)的特點(diǎn)，巨噬細(xì)胞吞噬物在形態(tài)上易于觀察和檢測(cè)，這些特征使得巨噬細(xì)胞在損傷時(shí)間推斷過(guò)程中具有重要的法醫(yī)學(xué)意義。
創(chuàng)傷修復(fù)是一個(gè)在時(shí)間和空間上受一定的細(xì)胞生物因子所調(diào)控的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程，
巨噬細(xì)胞 其中巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在創(chuàng)傷修復(fù)中的活躍表達(dá)近年來(lái)已被中外學(xué)者所關(guān)注，一些已考慮作為損傷時(shí)間推斷的有用參數(shù)。認(rèn)為主要參與損傷修復(fù)的巨噬細(xì)胞源性細(xì)胞因子有以下幾種。
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（Transforming Growth Factor-β，TGF-β）TGF-β是具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)的多肽細(xì)胞因子，來(lái)源于血小板、巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、增殖的上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，參與細(xì)胞的增殖分化、代謝和內(nèi)外間質(zhì)的形成，在組織創(chuàng)傷、修復(fù)、炎癥、骨質(zhì)再生、腫瘤發(fā)生等病理生理過(guò)程中起重要作用；TGF-β還是一種極強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)劑，能抑制多種免疫反應(yīng)，對(duì)單核巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞具有極強(qiáng)的趨化性。TGF-β通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期因子、轉(zhuǎn)錄因子、生長(zhǎng)因子、粘附分子和細(xì)胞基質(zhì)基因的啟動(dòng)、轉(zhuǎn)錄、降解等環(huán)節(jié)而實(shí)現(xiàn)其促進(jìn)或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的功能創(chuàng)緣組織表達(dá)。
巨噬細(xì)胞與損傷時(shí)間的關(guān)系
TGF-β能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞向創(chuàng)傷部位補(bǔ)充，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞基質(zhì)的合成，并能促進(jìn)表皮細(xì)胞的增殖。TGF-β是再生上皮化的重要標(biāo)志，是皮膚基質(zhì)和肉芽組織形成的重要且必不可少的條件，已證實(shí)它能影響愈合過(guò)程的各個(gè)階段，提供正常愈合的信號(hào)物質(zhì)，其中TGF-β與創(chuàng)傷關(guān)系最為密切。此外，TGF-β還促進(jìn)成纖維細(xì)胞趨化，產(chǎn)生膠原和纖維連接蛋白，抑制膠原降解，促進(jìn)纖維化發(fā)生。謝舉臨等認(rèn)為T(mén)GF-β是創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中促進(jìn)切創(chuàng)愈合的一類(lèi)強(qiáng)有力的細(xì)胞因子，它的表達(dá)異常直接影響傷口愈合的時(shí)間。
活體組織受損后，局部可發(fā)生出血、壞死，巨噬細(xì)胞吞噬組織間隙的血細(xì)胞和壞死組織后，吞噬物與胞漿內(nèi)的溶酶體融合，隨損傷時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降解，不能分解的物質(zhì)則在胞漿內(nèi)形成殘留物。BetzP表明，含吞噬物的巨噬細(xì)胞如噬脂細(xì)胞、噬血紅蛋白細(xì)胞和噬鐵細(xì)胞最早在傷后2～3天出現(xiàn)，損傷組織中出現(xiàn)吞噬細(xì)胞的時(shí)間有部位差別。在人體，腦和皮膚組織出現(xiàn)噬鐵細(xì)胞的時(shí)間于出血后15～17h，而在肺則出現(xiàn)在出血后30min左右。
巨噬細(xì)胞 組織內(nèi)出血時(shí)，從血管中逸出的紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞攝入并由其溶酶體降解，使來(lái)自紅細(xì)胞的血紅蛋白的Fe3+與蛋白質(zhì)合成電鏡下可見(jiàn)的鐵蛋白微粒，若干鐵蛋白微粒聚集成為光鏡下可見(jiàn)的棕黃色，較粗大的折光顆粒稱(chēng)為含鐵血黃素。
巨噬細(xì)胞破裂后，此色素也可見(jiàn)于細(xì)胞外。含鐵血黃素因含F(xiàn)e3+而被普魯氏藍(lán)染成藍(lán)色。LaihoK報(bào)道，在人體，損傷出血后21～48h皮膚和皮下出現(xiàn)噬鐵細(xì)胞，4～8天后則多。BetzP等通過(guò)研究人體皮膚損傷標(biāo)本認(rèn)為，含鐵血黃素最早于傷后3天檢測(cè)到，傷后8天則超過(guò)顯微鏡20%的區(qū)域均可見(jiàn)含鐵血黃素沉積。據(jù)此認(rèn)為只要20%或以上的檢測(cè)區(qū)域檢見(jiàn)含鐵血黃素沉積，就可認(rèn)定損傷時(shí)間大約為7天。因此，通過(guò)圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)巨噬細(xì)胞吞噬物推斷損傷時(shí)間有可能成為一種非常簡(jiǎn)便易行的方法。
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