精準醫(yī)療是未來醫(yī)療的方向，而醫(yī)療的起點是診斷，只有精確的診斷才可能談得上精確治療。隨著分子檢測技術的發(fā)展，越來越多的病原體檢測都可實現(xiàn)精準診斷。分子檢測技術以DNA和RNA檢測技術為主要代表，由于RNA僅在活的病原體中存在，故以RNA為靶標的診斷技術可以反應病原體的存活狀態(tài)，可以用于療效監(jiān)測，指導臨床精準用藥，達到精準醫(yī)療的目的。目前實現(xiàn)RNA檢測的主要有三種技術，分別為TMA,NASBA和SAT技術。
DNA檢測技術
主要包括了聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)和連接酶鏈反應(link chain reaction，LCR)。PCR電泳因其檢測結果存在假陽性而導致特異性下降；而熒光定量PCR雜交法、PCR微孔板雜交法及套式PCR等方法，較好地解決了敏感性和特異性問題。LCR法可解決PCR中存在的假陽性問題，敏感性也有所提高，是一種較好的檢測方法。
基于DNA的體外擴增其模板既可以來自于活菌也可來自死菌，因此不能作為非病毒病原體的活菌診斷，即使病人得到了有效的治療,病原體死亡DNA仍然能夠穩(wěn)定存在至少3周時間,檢驗結果無法及時反應治愈結果,不利于臨床獲取有價值的診斷信息,從而導致錯誤治療和抗生素過度使用.并且DNA穩(wěn)定而不容易降解的特性，也較易在實驗過程中產(chǎn)生污染。
RNA檢測技術
RNA為單鏈結構，容易降解，在死菌中不易被檢測到同時也不易造成污染。最早由美國Gen-Probe公司開發(fā)的TMA技術是逆轉錄酶介導的體外特異性擴增rRNA直接進行檢測的一項新的RNA檢測技術。rRNA即核糖體RNA，是細菌核糖體的主要成分，在每個原核生物中存在約103-104個拷貝。
國內(nèi)自主研發(fā)的RNA檢測技術稱為RNA實時熒光恒溫擴增檢測技術（Simultaneous Amplification and Testing）,簡稱SAT技術，其基本原理如下：
1.SAT技術以rRNA為靶標，在M-MLV反轉錄酶作用下產(chǎn)生一條cDNA鏈
2.M-MLV反轉錄酶的RNaseH酶活性將雜合的RNA/DNA中RNA降解，再經(jīng)M-MLV反轉錄酶作用產(chǎn)生一個cDNA拷貝
3.隨后T7RNA多聚酶以反轉錄的DNA為模板擴增產(chǎn)生100-1000個RNA拷貝
4.每一個RNA拷貝從反轉錄開始再一次進入擴增循環(huán)，同時擴增產(chǎn)生的RNA拷貝與優(yōu)化的探針特異結合產(chǎn)生熒光信號
5.由熒光檢測儀捕獲熒光信號進行分析。
SAT技術的特點：
1）快速
■ SAT技術在恒溫42℃經(jīng)40-60鐘即可獲得理想的實驗結果。
2）準確
■ 特異性提取、特異性引物以及特異性探針保證了檢測結果的高特異性和準確性。
3）特異性提取、特異性引物以及特異性探針保證了檢測結果的高特異性和準確性。低污染
■ 由于擴增產(chǎn)物為RNA，減少了PCR過程中對實驗儀器和環(huán)境造成的污染，避免了交叉污染及假陽性。
4）抗抑制
■ 為了減少樣本的抑制反應，SAT對于樣本的制備采用磁珠吸附法，特異性捕獲靶標確保了高特異性的提取，通過水相洗滌最大程度地去除各種雜質，進而避免了假陰性結果的出現(xiàn)。
5）高靈敏
■ 此外為了減少樣本的抑制反應，SAT對于樣本的制備采用磁珠吸附法，特異性捕獲靶標確保了高特異性的提取，通過水相洗滌最大程度地去除各種雜質，進而避免了假陰性結果的出現(xiàn)。SAT擴增效率極高，30min即可獲得109倍的擴增，再通過實時檢測，整個過程僅需要2.5h即可完成診斷，提高了檢測的靈敏度。同時SAT的特異性提取、特異性引物以及特異性探針保證了檢測結果的高特異性和準確性。
6）無創(chuàng)檢測
■ 該技術可以檢測包括尿液在內(nèi)的多種樣本，無需抽血穿刺，實現(xiàn)無創(chuàng)檢測。大量臨床數(shù)據(jù)表明，SAT技術檢測不同部位的樣本結果一致性很好。
7）輔助判愈
■ 由于RNA只存在于活的細菌中，所以RNA檢測結果可以用于療效判斷，符合目前精準醫(yī)療的要求。
作為一項成熟的檢測技術，SAT目前已成功地應用于沙眼衣原體、淋病奈瑟菌、解脲脲原體、生殖支原體、結核分枝桿菌、肺炎支原體、腸道病毒以及甲流病毒等多種臨床檢測。
上海肺科醫(yī)院Zhenling C等采用SAT技術檢測結核分枝桿菌，其靈敏度可達100CFU/ml。廣州胸科醫(yī)院譚耀駒等收集疑似結核病患者的痰液734份、體液標本94份(包括68份胸腔積液、21份腦脊液、5份關節(jié)積液，以下統(tǒng)稱“體液”)及病灶組織標本76份，共計904份標本。同時采用SAT法、改良羅氏培養(yǎng)法進行檢測，培養(yǎng)陽性者進行基因芯片菌種鑒定。擴大金標準（培養(yǎng) PCR法）作比對，SAT法在痰液、體液、病灶組織標本的靈敏度和特異度分別為96.30％(260/270)、99.35％(461/464)；96.97％(32/33)、100.00％(61/61)；100.00％(27/27)、97.96％(48/49)。說明SAT具有極高的靈敏度和特異性。另外，Zhenling C等的研究結果顯示，通過SAT技術檢測，在涂陰患者標本中的陽性率為39.2%，其結果與臨床診斷結果一致。上海復旦兒科醫(yī)院Jin X等人使用SAT-CA16試劑對CA16病原體進行的檢測，SAT檢測CA16的靈敏度和特異性分別達到100%和99.2%。南方醫(yī)科大廣濟醫(yī)院高志華等人，以及浙江金華市中心醫(yī)院鄭雅萍等人采用SAT技術對同一患者的拭子和尿液標本進行檢測，檢測結果符合率高達100％，充分說明SAT檢測生殖道病原體可兼并尿液和拭子檢測。
這些研究均表明,SAT檢測技術準確度非常高，并可采用多種樣本類型，可為臨床醫(yī)生提供有力的臨床診斷依據(jù)。
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