作者：Lucky King
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咖啡豆醇通過上調(diào)ATF3誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡，回復(fù)170620可下載，一月有效
ATF3轉(zhuǎn)錄激活因子，activating transcription factor 3，屬于含亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子ATF/CREB家族成員，是一個應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)基因。
使用0、12.5、25和50μM的咖啡豆醇處理HCT116細(xì)胞24小時，蛋白質(zhì)印跡檢測斷裂的PARP。用25μM處理HCT116細(xì)胞，斷裂的PARP略微增加；50μM處理后顯著增加（Fig.1A）。
PARP(poly ADP-ribose polymerase)是DNA修復(fù)酶，是細(xì)胞凋亡核心成員caspase切割的底物，凋亡指標(biāo)。
此外，使用50μM咖啡豆醇處理SW480、LoVo、HT-29細(xì)胞系，斷裂的PARP表達(dá)顯著增加（Fig.1B）。
結(jié)果表明：咖啡豆醇可能誘導(dǎo)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞凋亡。
用咖啡豆醇處理HCT116細(xì)胞24小時，使用ATF3抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡，劑量依賴性地增加ATF3蛋白水平（Fig.2A）；
此外，在咖啡豆醇kahweol處理的SW480、LoVo、HT-29細(xì)胞也觀察到ATF3蛋白水平增加（Fig.2B）；
在咖啡豆醇處理3小時后ATF3蛋白水平開始增加，24h達(dá)最大值（應(yīng)當(dāng)再做個48h…當(dāng)值持平或者下降時，挑出達(dá)到最大值得最小濃度劑量）（Fig.2C）；
ATF3功能實(shí)驗(yàn)：構(gòu)建ATF3表達(dá)載體，咖啡豆醇處理，ATF3過表達(dá)增加了斷裂的PARP水平（Fig.2D）；轉(zhuǎn)染siRNA敲除ATF3，減少了咖啡豆醇介導(dǎo)的斷裂PARP水平（Fig.2E）。
這些發(fā)現(xiàn)表明：咖啡豆醇介導(dǎo)的ATF3表達(dá)可能有助于人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。
咖啡豆醇誘導(dǎo)HCT116、SW480、LoVo、HT-29細(xì)胞中ATF3的mRNA上調(diào)（Fig.3A），這與咖啡豆醇對ATF3蛋白水平的影響相似；
采用熒光素酶實(shí)驗(yàn)測量ATF3啟動子活性，觀察到咖啡豆醇處理HCT116、SW480、LoVo、HT-29細(xì)胞后，增強(qiáng)了ATF3啟動子活性（Fig.3B）；
在咖啡豆醇處理后3小時，ATF3啟動子開始活化（Fig.3C）。
為確定kahweol誘導(dǎo)的ATF3啟動子激活相關(guān)的特定位點(diǎn)，構(gòu)建ATF3啟動子螢光素酶載體（pATF3-1420/+34、pATF3-718/+34、pATF3-514/+34、pATF3-318/+34，pATF3-147/+34和pATF3-84/+34）轉(zhuǎn)染到HCT116細(xì)胞中，用50μM的kahweol處理24小時；
pATF3-1420/+34和pATF3-718/+34，將ATF3啟動子活性提高了7倍（Fig.4A）
使用含有-147至-84區(qū)域的ATF3啟動子載體將活性提高了7倍，而沒有使用-147至-85區(qū)域的載體僅僅稍微增加了ATF3啟動子活性，這表明kahweol結(jié)合的相應(yīng)位點(diǎn)/元件可能在-147到-85區(qū)域。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)ushi tarazu（Ftz）和CREB是ATF3啟動子中的順式作用元件，含有-147至-85區(qū)域。為了鑒定是哪個順式作用元件起的作用，將每個位點(diǎn)缺失的ATF3啟動子載體轉(zhuǎn)染到HCT116細(xì)胞中，并用50μM的kahweol處理。
當(dāng)CREB位點(diǎn)缺失時，kahweol誘導(dǎo)的ATF3啟動子活性顯著降低。然而，刪除Ftz位點(diǎn)并不影響kahweol誘導(dǎo)的ATF3啟動子活性（Fig.4B）。
這些數(shù)據(jù)表明CREB對于kahweol誘導(dǎo)的ATF3表達(dá)可能是重要的。
為了闡明咖啡豆醇與ATF3表達(dá)相關(guān)的上游激酶的關(guān)系，在HCT116細(xì)胞中預(yù)處理各種激酶抑制劑如PD98059（ERK1/2抑制劑）、SB203580（p38抑制劑）、SP600125（JNK抑制劑）、LiCl（GSK3β抑制劑）。
添加ERK1/2抑制劑PDK18059、GSK3β的抑制劑LiCl，顯著降低了kahweol介導(dǎo)的ATF3表達(dá)（Fig.5A、5D）；
But，其他激酶抑制劑并不影響ATF3表達(dá)（Fig.5B、5C）。
這些數(shù)據(jù)表明：ERK1/2和GSK3β可能是kahweol介導(dǎo)的ATF3表達(dá)的主要上游激酶。
文章思路很清晰，容易理解。這個期刊，急于畢業(yè)的研究僧、晉職稱的小大夫們可以留意留意。
