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       免疫學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展對(duì)精度的要求越來(lái)越高，一般的酶免檢測(cè)技術(shù)已逐漸無(wú)法適應(yīng)這種形勢(shì)的需要?，F(xiàn)今發(fā)展的主流已不再是用放射性同位素標(biāo)記的測(cè)定方法(避免污染環(huán)境及對(duì)人體損害)，而是轉(zhuǎn)向于能在任何地方操作的快速均相和固相測(cè)定，最終趨向于能夠槍測(cè)到皮克或10負(fù)18摩爾級(jí)的、非同位素的、自動(dòng)或半自動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室測(cè)定技術(shù)，發(fā)光免疫分析技術(shù)順應(yīng)了這一潮流，開(kāi)創(chuàng)了免疫診斷的新紀(jì)元。

       發(fā)光免疫分析是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)快速及無(wú)放射危害的分析技術(shù)。70年代末以來(lái)得到了迅速發(fā)展，目前在國(guó)際上已經(jīng)實(shí)現(xiàn)商品化和產(chǎn)業(yè)化的發(fā)光免疫分析產(chǎn)品，基本上可以分為：化學(xué)發(fā)光、時(shí)間分辨熒光(也稱(chēng)時(shí)間延遲光致發(fā)光)、電化學(xué)發(fā)光(也稱(chēng)場(chǎng)致發(fā)光和電致發(fā)光)幾種。

       1、化學(xué)發(fā)光

       化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中發(fā)出可見(jiàn)光的現(xiàn)象。通常是指有些化合物不經(jīng)紫外光或可見(jiàn)光照射，通過(guò)吸收化學(xué)能(主要為氧化還原反應(yīng))，從基態(tài)激發(fā)至激發(fā)態(tài)。退激時(shí)通過(guò)躍遷(或?qū)⒓ぐl(fā)能轉(zhuǎn)移至受體分子上)，釋放能量產(chǎn)生光子，以光形式放出能量從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。其主要特點(diǎn)為消耗發(fā)光劑。同時(shí)量子效率相對(duì)較低。

       1.1 按化學(xué)反應(yīng)類(lèi)型分類(lèi)：可分為酶促化學(xué)發(fā)光和非酶促化學(xué)發(fā)光兩類(lèi)。其中酶促化學(xué)發(fā)光主要包括辣根過(guò)氧化物酶(HRP)系統(tǒng)、堿性磷酸酶 (ALP)系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)等。酶促發(fā)光的共同特點(diǎn)為發(fā)光過(guò)程中作為標(biāo)記物的酶基本不被消耗，而反應(yīng)體系中發(fā)光劑充分過(guò)最，因此發(fā)光信號(hào)強(qiáng)而穩(wěn)定，且發(fā)光時(shí)間較長(zhǎng)。因此可采用速率法測(cè)量，故檢測(cè)方式簡(jiǎn)單、成本較低。酶促反應(yīng)的主要缺點(diǎn)為工作曲線可能隨時(shí)間漂移，而且低端斜率容易呈非線性下移。而非酶促化學(xué)發(fā)光包括吖啶酯系統(tǒng)、草酸酯系統(tǒng)、三價(jià)鐵一魯米諾系統(tǒng)等。非酶促發(fā)光的共同特點(diǎn)為發(fā)光過(guò)程中標(biāo)記物被消耗，同時(shí)作為標(biāo)記物的發(fā)光劑是發(fā)光反應(yīng)的瓶頸，即含量總是相對(duì)不足，因此發(fā)光信號(hào)持續(xù)時(shí)間較短；如果直接在免疫反應(yīng)杯中啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)，由于發(fā)光劑被很快消耗，故只能進(jìn)行一次性測(cè)量。所以重復(fù)性較差。為降低檢測(cè)成本并實(shí)現(xiàn)重復(fù)測(cè)量，目前普遍采用原位進(jìn)樣加流動(dòng)池的時(shí)間積分測(cè)量方式。因此儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高，而且反復(fù)使用的流動(dòng)池可能導(dǎo)致交叉污染；并目沖洗或進(jìn)樣中產(chǎn)生的氣泡也會(huì)干擾測(cè)定；同時(shí)繁瑣冗長(zhǎng)的沖洗過(guò)程也會(huì)成為提高檢測(cè)效率的瓶頸。另外，使用磁性或非磁性微粒時(shí)，強(qiáng)烈的散射吸收作用也會(huì)降低靈敏度。

       1.2 按發(fā)光持續(xù)時(shí)間分類(lèi)：可分為閃光和輝光兩類(lèi)，閃光型發(fā)光時(shí)間在數(shù)秒內(nèi)，如吖啶酯系統(tǒng)。其檢測(cè)方式一般采用原位進(jìn)樣和時(shí)間積分法測(cè)量，即在檢測(cè)器部位加裝進(jìn)樣器，并保證加入發(fā)光劑和檢測(cè)2個(gè)過(guò)程同步進(jìn)行；同時(shí)以整個(gè)發(fā)光信號(hào)峰的面積為發(fā)光強(qiáng)度。而輝光型發(fā)光時(shí)間在數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘以上，如HRP一魯米諾系統(tǒng)、ALP—AMPPD系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶-魯米諾系統(tǒng)等。其信號(hào)檢測(cè)無(wú)需原位進(jìn)樣，一般以速率法測(cè)量，即在發(fā)光信號(hào)相對(duì)穩(wěn)定的區(qū)域任意點(diǎn)測(cè)量單位時(shí)間的發(fā)光強(qiáng)度。

       測(cè)量化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的光強(qiáng)度，求得某些化學(xué)物質(zhì)和生物物質(zhì)的含量，尤其與免疫學(xué)方法結(jié)合以后形成的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)，其既具有發(fā)光檢測(cè)的高度靈敏性，又具有免疫分析的高度特異性，檢測(cè)快速，試劑無(wú)放射危害，檢測(cè)限達(dá)10負(fù)15 mol／L。

       1.3 評(píng)價(jià)：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物已廣泛應(yīng)用于抗原、半抗原和抗體的檢測(cè)，與放射性核素標(biāo)記物相比較，它的優(yōu)點(diǎn)在于安全(無(wú)放射危害)、穩(wěn)定、測(cè)量快速、靈敏度高、線性范圍寬、自動(dòng)化程度高、減少了人為的誤差。檢測(cè)快速縮短了等待結(jié)果的時(shí)間，無(wú)需批量檢測(cè)可隨到隨測(cè)保證及時(shí)提供結(jié)果。缺點(diǎn)在于一般化學(xué)發(fā)光是標(biāo)記催化酶或化學(xué)發(fā)光分子的發(fā)光反應(yīng)，一般發(fā)光不穩(wěn)定，為問(wèn)斷的、閃爍性發(fā)光，而且在反應(yīng)過(guò)程中易發(fā)生裂變，導(dǎo)致反應(yīng)結(jié)果不穩(wěn)定。此外。檢測(cè)時(shí)需對(duì)結(jié)合相、游離相進(jìn)行分離，操作步驟多，測(cè)試成本高。主要問(wèn)題是化學(xué)發(fā)光的產(chǎn)生通常是瞬間完成的，發(fā)光的峰值很快衰減，再是本底較高和干擾妨礙應(yīng)用。

       1.4 代表儀器

       1.4.1 美國(guó)拜耳公司最新診斷產(chǎn)品——ACS：180系列全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，以吖啶酯作為標(biāo)記，量度AE標(biāo)記物化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的光量為基礎(chǔ)，靈敏度可達(dá)10負(fù)15 g／mL。

       1.4.2 美國(guó)雅培公司生產(chǎn)的AxSYM系列全自動(dòng)免疫發(fā)光分析儀將3種技術(shù)于一機(jī)，可用于非均相標(biāo)記微粒子酶免發(fā)光分析(MEIA)、離子捕捉發(fā)光分析(ICIA)和均相標(biāo)記熒光偏振免疫發(fā)光技術(shù)(FPIA)，目前已有80多個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目可供臨床應(yīng)用。