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一、基礎(chǔ)知識(shí)

（一）植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程

1.相關(guān)概念：

①在植物的        過(guò)程中，細(xì)胞在        和        上都會(huì)出現(xiàn)        的差異，形成這些差異的過(guò)程叫做細(xì)胞分化。

②        的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過(guò)        ，形成愈傷組織。由        的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生        的過(guò)程，稱為植物細(xì)胞的脫分化，或者叫做去分化。

③脫分化產(chǎn)生的        繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以        成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做        。

2.植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程：植物組織培養(yǎng)的過(guò)程可以簡(jiǎn)要地歸納為“植物組織→a→b→c→移栽成活”，其中a、b、c處應(yīng)填寫的內(nèi)容依次是：        。

（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素

1.植物材料的選擇：不同的植物組織，培養(yǎng)的        差別很大。因此，        直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。對(duì)于同一種植物材料，材料的        等也會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.營(yíng)養(yǎng)：離體的植物組織和細(xì)胞，對(duì)        等條件的要求相對(duì)特殊，需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的一種培養(yǎng)基是        培養(yǎng)基，其主要成分包括：        及有機(jī)物等。

3.激素：植物組織培養(yǎng)時(shí)，需在配制好的MS培養(yǎng)基添加植物激素，常用的植物激素有：        等。其中        是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、        的關(guān)鍵性激素。

4.環(huán)境因素：除了上述因素外，        等條件也很重要。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在        左右，溫度控制在        ℃，并且每日用日光燈照射        h。

二、實(shí)驗(yàn)操作

（―）制備MS固體培養(yǎng)基：

1.配制各種母液：配制母液時(shí)，無(wú)機(jī)物中大量元素濃縮        倍，微量元素濃縮        倍，常溫保存。        一般可按1mg/mL的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液。實(shí)驗(yàn)室一般使用        ℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來(lái)制備培養(yǎng)基，制備時(shí)需要根據(jù)各種母液的        ，計(jì)算用量。

2.配制培養(yǎng)基：配制1LMS培養(yǎng)基時(shí)，先將稱好的瓊脂加入800mL        ，加熱使瓊脂熔化，然后加入        30g，取配制好的        的母液，依次加入，加        定容至1000mL，調(diào)節(jié)        ，最后分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50mL或100mL。

3.滅菌：將分裝好的培養(yǎng)基連同        一起進(jìn)行       

（二）外植體消毒：從        上選取菊花莖段，用        沖洗后，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。然后用        吸干表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為        的酒精中搖動(dòng)2～3次，持續(xù)        ，立即將外植體取出，在        中清洗。取出后仍用        吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為        溶液中1～2min。取出后，在無(wú)菌水中至少清洗        次，漂凈        。

（三）接種

1.消毒滅菌：接種前用體積分?jǐn)?shù)為        將工作臺(tái)擦拭一遍。所有的接種操作都必須在        進(jìn)行，并且每次使用器械后，都需要用火焰        。

2.接種操作：將        的菊花莖段在無(wú)菌培養(yǎng)皿中切成長(zhǎng)約        的小段。左手持瓶，使        ；右手        ，右手進(jìn)行此操作時(shí)應(yīng)注意        ，不要        。每瓶接種        塊外植體。接種后，將封口膜重新扎好。

（四）培養(yǎng)：接種后的錐形瓶最好放在        中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間應(yīng)        。培養(yǎng)溫度控制在1        ，并且每日用日光燈光照        。

（五）移栽：在移栽生根的菊花試管苗之前，應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜，讓試管苗        。然后用        清洗根部的        ，將幼苗移植到        的        等環(huán)境下生活一段時(shí)間，等        后再移栽到土壤中。

（六）栽培：每天觀察并記錄        ，適時(shí)洗水、施肥，直至開(kāi)花。

三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：本課題主要可從以下幾方面進(jìn)行分析評(píng)價(jià)：（以下內(nèi)容參照“教材”及“教師教學(xué)用書(shū)”編寫）

1.對(duì)        分析。接種3～4d后，在        的培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。要適時(shí)統(tǒng)計(jì)        ，分析接種操作是否符合        要求。

2.是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化。觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，看看是否培養(yǎng)出了        ，記錄        。統(tǒng)計(jì)更換培養(yǎng)基后        的比例和時(shí)間。

3.是否進(jìn)行了        。做好統(tǒng)計(jì)和對(duì)照，填好結(jié)果記錄表，培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。

4.生根苗的移栽是否合格。生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是        。一般使用        的辦法。可根據(jù)幼苗移栽到露地后，        等判斷移栽是否合格。

一、基礎(chǔ)知識(shí)

（一）1.①個(gè)體發(fā)育    形態(tài)、結(jié)構(gòu)    生理功能    穩(wěn)定性

②離體    細(xì)胞分裂    高度分化    愈傷組織

③愈傷組織    重新分化    再分化

2.形成愈傷組織、長(zhǎng)出叢芽、生根

（二）1.難易程度    植物材料的選擇    年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短

2.營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境    MS    大量元素、微量元素

3.生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素    生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素    脫分化和再分化

4.pH、溫度、光照    5.8    18～22    12

二、實(shí)驗(yàn)操作

（―）1.10    100    激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物    4    濃縮倍數(shù)

2.蒸餾水    蔗糖    大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素    蒸餾水    pH

3.其他器械    高壓蒸汽滅菌

（二）生長(zhǎng)旺盛的嫩枝    流水    無(wú)菌吸水紙    70%    6～7_S    無(wú)菌水    無(wú)菌吸水紙    0.1%的氯化汞    3    消毒液

（三）1.70%的酒精    酒精燈旁    灼燒滅菌

2.消過(guò)毒    0.5～1cm    瓶口旋轉(zhuǎn)通過(guò)火焰    用鑷子夾取菊花莖段，插入培養(yǎng)基中    方向    倒插    6～8

（四）無(wú)菌箱    定期消毒    18～22℃    12h

（五）在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日    流水    培養(yǎng)基    消過(guò)毒    蛭石或珍珠巖    幼苗長(zhǎng)壯

（六）幼苗生長(zhǎng)情況

三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：

1.接種操作中污染情況    接種操作中被雜菌污染    污染率    無(wú)菌

2.愈傷組織    多長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)出愈傷組織    愈傷組織進(jìn)一步分化成根和芽

3.統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄

4.既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基，又不能傷及根系    無(wú)土栽培    能否正常生長(zhǎng)、移栽的成活率