細胞凋亡是多基因嚴格控制的過程,這些基因在種屬之間非常保守,如Bcl-2家族、Caspase家族、抑癌基因P53等。凋亡過程的紊亂可能與許多疾病的發(fā)生有直接或間接的關(guān)系,如腫瘤和自身免疫性疾病等,因此如果你是研究腫瘤或退行性疾病,細胞凋亡的檢測往往是必要的,因為這一指標將會成為后續(xù)機制研究的風向標。
由于細胞凋亡的過程有典型的形態(tài)和分子層面的變化,檢測方法也是多樣的,常用的有Annexin V/PI雙染法、TUNEL檢測法和Caspase-3活性檢測法。其中,Annexin V/PI雙染法因其可區(qū)分凋亡早期和晚期和方便量化而被廣泛使用。磷脂酰絲氨酸(Phosphatidyl serine,PS)在細胞凋亡的早期,會從細胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-V能與PS高親和力特異性結(jié)合,把綠色熒光分子FITC連接到Annexin-V即可標志內(nèi)膜翻轉(zhuǎn)的凋亡小體。而當細胞發(fā)生凋亡時,細胞膜通透性增強,PI可進入細胞結(jié)合DNA并發(fā)出熒光。因此通過流式分析Annexin-V-FITC和PI的信號分布便可區(qū)分凋亡早期(Annexin-V-FITC陽性+PI陰性)和晚期(Annexin-V-FITC陽性+PI陽性)的細胞(圖3)。