二、脫毒方法 植物的病毒除豆類等一部分作物外，種子均不傳染病毒，而營養(yǎng)繁殖的植物病毒病的蔓延日益顯著，幾乎遍布所有所有這類植物。病毒的粒子極其微小，只有在電子顯微鏡下才能確定，防治極其困難。自50年代發(fā)現(xiàn)用組織培養(yǎng)可以脫除病毒以來，現(xiàn)已在生產(chǎn)上廣泛應用。
[一]莖尖脫毒 原理：感染病毒植株體內的病毒分布并不均勻，病毒的數(shù)量隨植株的年齡與部位而異，越靠近莖頂端區(qū)域的病毒的濃度也越低，分生區(qū)域內無維管束，病毒只能通過胞間連絲傳遞，趕不上細胞的不斷分裂和活躍的生長速度，所以生長點含有的病毒數(shù)量極其微少，幾乎檢測不出病毒，因此剪切的莖尖愈小愈佳，但太小時不易成活，過大則不能保證完全除去病毒，不同種類植物和不同種類病毒在莖尖培養(yǎng)時切取的莖尖大小也不相同。 方法：在解剖鏡下，一手用鑷子夾住無菌的莖尖，一手用鋒利的無菌刀逐層剝去生長點周圍的葉片，直到達到晶瑩發(fā)亮的光滑圓頂為止，根據(jù)不同目的可取帶2-3個葉原基的莖尖或大一點的帶2-3片幼葉的莖尖。到底多大的生長點才合適，當然越小越好，比如用0.1毫米以下的生長點，去病毒的效果就較好，但成活率低并且由于體積太小，常常使得培養(yǎng)時間延長到一年，甚至會更長，這不但歷時過長而且也增加了轉換培養(yǎng)基時材料污染的機會。一般說來，根據(jù)病毒種類不同切取約0.1-1毫米大小的生長點就可以去掉病毒。大部分都是切取0.2-0.5毫米帶1-2個葉原基的莖尖為培養(yǎng)材料。
[二]高溫脫毒 原理：植物組織處于高于正常溫度的環(huán)境中，組織內部的病毒受熱以后部分或全部鈍化，但寄主植物的組織很少或不會受到傷害。但每種植物都有其臨界溫度范圍，超過這一臨界范圍或在此范圍內處理時間過長，都會導致寄主植物組織受傷。為此可使用變溫的處理方法，高（40℃）和低溫（16-20℃）交替處理，既能保證植物材料不受傷害，又能除去病毒。 (1)溫湯浸漬處理：適用于休眠器官、剪下的接穗或種植的材料，在50℃左右的溫水中浸漬數(shù)分至數(shù)小時，方法簡便易行但易致使材料受傷。 (2)熱風處理：將生長的盆栽植株移入溫熱治療（箱）室內，處理溫度和時間因植物種類和器官的生理條件而異，一般在35-40℃，短則幾十分中長可達數(shù)月。
[三]低溫脫毒 原理：亦稱冷療法，菊花植株在5℃下，經(jīng)4-7.5個月處理后，切取莖尖進行離體培養(yǎng)，可以有效去除菊花矮化病毒與菊花褪綠斑駁病毒，僅莖尖培養(yǎng)則無此效果，目前低溫脫毒的報道尚少，但不失為一種脫毒的方法。 [四]化學療法脫毒 原理：許多化學藥品（包括嘌呤、嘧啶類似物、氨基酸、抗菌素等）在植物體內和植物葉片內，進行其抑制病毒的增殖或使之不活化的測定，在某種程度上抑制了病毒的增值或不活化。整株植物用化學療法不能除去病毒，但離體培養(yǎng)和原質體培養(yǎng)效果明顯。
[五]愈傷培養(yǎng)脫毒 原理：從感染組織誘發(fā)的愈傷組織，不是所有的細胞都帶有病毒，感染愈傷組織分化出的無病毒植株，也證明一些愈傷組織細胞實際上并不含有病毒。原因是病毒復制與細胞增殖不同步；同時發(fā)生變異的一些細胞獲得對病毒感染的抗性，抗性細胞與敏感細胞共同存在于母體組織之中，由此分化出的植株也就有部分是無病毒植株。
[六]珠心胚培養(yǎng) 原理：具有多胚性的種子（如柑桔）除了一個有性胚之外，其他的胚是來源于不含病毒的珠心細胞。通過培養(yǎng)珠心胚，可以得到除去病毒的新生系，然后嫁接繁殖成無病毒植株。
[七]花藥脫毒 原理：果樹多為無性繁殖，長期種植后病毒積累較多，病毒病危害嚴重，花藥培養(yǎng)也是一個很好的途徑，目前已草莓上廣泛使用，脫毒率在 90% 以上 。
[八]綜合脫毒法 1。選擇無或少病毒植株 2。接種去分化長愈傷組織 3?？旆泵缒?4。高溫+莖尖處理 5。重復處理2-3次 6。鑒定有無病毒 7。生產(chǎn)應用 三、病毒檢測 1、直觀測定法 直接觀察植株莖葉有無這一病毒可見的癥狀特征是一種最簡便的方法。然而在寄主植物上感染病毒后出現(xiàn)癥狀需要較長時間，還有的不使寄主植物表現(xiàn)可見癥狀，因此需要更敏感的測定方法。 2、指示植物法 利用病毒在其他植物上出現(xiàn)的病毒特征作為鑒別病毒種類的標準，這種專用易產(chǎn)生病毒癥狀特征的寄主即為指示植物，又稱鑒別寄主。癥狀分兩種類型，一種是接種后產(chǎn)生系統(tǒng)的癥狀，并擴張到非接種的部位；一種是只在接種部位產(chǎn)生局部病斑，根據(jù)病毒的類型而出現(xiàn)壞死、退綠或環(huán)狀病斑。指示植物有荊芥、千日紅、昆諾阿藜和各種煙草。 3、抗血清鑒定法 植物病毒是由核酸與蛋白質組成的核蛋白，可作為一種抗原，注射到動物體內即產(chǎn)生抗體。抗體存在于血清之中稱為抗血清。不同病毒產(chǎn)生的抗血清都有各自的特異性，用已知病毒的抗血清來鑒定未知病毒，這種抗血清就成為高度專一性的試劑，特異性高，是目前快速定量測定病毒的常規(guī)診斷。 4、酶聯(lián)免疫法（見圖） 5、電子顯微鏡觀察法（見圖） 6、PCR檢測法
