專利名稱：復方瑞爾康抗癌藥物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥學，涉及一種中藥，特別涉及一種復方瑞爾康抗癌藥物及其制備方法。
背景技術：
血液腫瘤(急、慢性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤，骨髓增生異常綜合癥等)是一組嚴重危害青少年健康的常見難治病?；熂肮撬枰浦?BMT)的長期緩解率(CCR)僅分別為15-17％、50％，且毒副作用大，經(jīng)費高昂，成為嚴重社會問題，近10年來急性白血病M3(亦稱急性早幼粒細胞白血病，APL)的治療有所改善，先后出現(xiàn)了維甲酸、三氧化二砷(亞砷酸)，前者雖完全緩解率(CR)可高達85％，但因其高耐藥性和副作用而受限，CCR僅20％，亞砷酸CR可達88％，但CCR仍低(54％)，且毒副作用大，超過50％，若不及時處理常危及生命。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服化療、維甲酸耐藥而長期生存率低(20％)，氧化砷毒副作用大的缺陷，提供一種抗癌效率高，無毒，經(jīng)濟，方便的復方瑞爾康抗癌藥物及其制備方法。
1998年申請人經(jīng)檢索資料，發(fā)現(xiàn)砷元素本身無毒，與氧結合則形成三氧化二砷(As2O3)劇毒，與硫結合為硫化砷(AsS)則無毒或微毒，因此申請人瞄準AsS(雄黃、拉丁文Realgar)開展了制備及基礎應用研究，對急性白血病M3CR26/28例(92.89％)，中位緩解期已3.6年，CCR24/26例(92.31％)，居世界高水平，且無明顯毒副作用，門診用藥，經(jīng)濟(400-800元/月)、方便，對其它血液腫瘤及癌癥亦有一定療效，屬于廣譜抗癌藥。其機理與調(diào)控基因、抑制腫瘤血管生成，進而促進癌細胞凋亡及分化而達到治愈的目的，屬于選擇性抗癌凋亡劑，為腫瘤治療帶來新途徑。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是復方瑞爾康抗癌藥物，其特點是，由純化瑞爾康及甘草組成，其中純化瑞爾康為50％～80％，甘草為20％～50％。
復方瑞爾康抗癌藥物的制備方法，包括以下步驟1.按上述配方取純化瑞爾康通過膠體磨，使雄黃膠體化，微粒直徑＜20μm；2.加入稀鹽酸浸泡24h；3.將鹽酸浸泡后的膠體化純化瑞爾康用水進行沖洗，置入恒溫干燥箱進行烘干，溫度為48℃，時間24h～48h；4.對干燥后的膠體化純化瑞爾康按配方加入甘草粉充分混合；5.對混合后的配料進行常規(guī)的滅菌；6.經(jīng)滅菌后的材料裝入膠囊即成。
本發(fā)明的復方瑞爾康抗癌藥物有以下效果1.適應癥廣泛，對血液腫瘤及多種實體瘤均有效。
2.選擇性誘導瘤細胞凋亡，兼有輕度誘導分化，而對骨髓造血無抑制作用。
3.無交叉耐藥性，對復發(fā)、難治APL亦有效。
4.誘導緩解率及長期緩解率均高達90％以上。
5.無DIC并發(fā)癥，不引起嚴重出血。
6.可通過血腦屏障，不易并發(fā)中樞神經(jīng)白血病。
7.毒副作用輕微，對癥處理可緩解。
8.可門診治療，不需住院及化療，痛苦少，經(jīng)費低。
圖1是本發(fā)明的復方瑞爾康抗癌藥物制備工藝流程圖。
具體實施例方式
以下結合發(fā)明人依照上述技術方案進行的藥理、毒理、藥效試驗和作用機理，對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
一、藥學研究1、方組復方瑞爾康由純化瑞爾康(中藥雄黃的拉丁文Realgar音譯)及甘草(Glycyrrhixae)組成，其成分為瑞爾康50％～80％，甘草20％～50％，制成膠囊，瓶裝0.25g/膠囊×40粒。
2、制備方法按本發(fā)明的上述制備方法進行。因雄黃難溶于水，吸收率極低(0.04％)，且含氧化砷5％-10％，制備目的使雄黃膠體化，微粒直徑＜20μm，便于吸收。為預防氧化砷中毒，通過酸洗水飛除去氧化砷。
3、成份分析及穩(wěn)定性實驗瑞爾康(Realgar)湖南產(chǎn)。
分子式AsS(硫化砷)(As4S4、As2S3)，分子量427.93，經(jīng)X線衍射分析，1998、2000、2003年3次樣檢，其中1998年測定As4S493％、As2S33％；其他4％；2000年測定As4S493％、As2S32％；其他5％；2003年測定As4S492％、As2S32％；其他6％；保存5年性能穩(wěn)定。
二、藥理研究1、藥效實驗純化瑞爾康711μg·L-1作用72小時，通過MTT檢測，對各種瘤細胞的抑制率分別為急性早幼粒細胞白血病細胞(NB4)85％，耐藥的急性早幼粒細胞白血病細胞(MR2)69％，B細胞淋巴瘤細胞(Raji)79.34％；慢性粒細胞白血病細胞(K562)30.57％(2844μg·L-1為83.60％)；急性髓細胞白血病細胞(HL-60)26.25％(2844μg·L-1為77％)；T細胞淋巴瘤細胞(Jurkat)17.22％(2844μg·L-1為67％)(P＜0.01)，其效果依次為NB4＞Raji＞MR2＞K562＞HL-60＞Jurkat，當藥量成倍加大后，其療效亦成倍增加。
2、藥代動力學研究純化瑞爾康單次灌胃500mg·kg-1后很快吸收進入血液，4h達高峰，且在血液中消除較快，不存在蓄積傾向，屬一室模型。吸收后迅速分布至肝、脾、肺、腎、胃腸壁、骨、皮膚、心、腦組織等，與胃腸組織親和力量大，其次為腎、骨骼、肺、肝、皮膚，在骨骼、皮膚、脾、腦組織中濃度下降較慢，提示有蓄積可能，尿砷排泄量不足給藥劑量的0.04％，表明瑞爾康進入血液的量較少，且吸收后主要經(jīng)胃腸道排泄。
3、毒理研究純化瑞爾康500mg·kg-1對小白鼠的LD50測定結果(Bliss法)半致死劑量(LD50)＝19.3262±1.0736g·kg-1，可信限區(qū)間為18.2825g·kg-1～20.4296g·kg-1。毒理學規(guī)定≥10g·kg-1為無毒制劑。
4、方解及作用機理研究瑞爾康(雄黃)為選擇性誘導瘤細胞凋亡的抗癌主藥，主要成份為硫化砷；甘草為輔，主要成份是甘草甜素，具有解毒、保肝、抗過敏等作用，二者相配，相輔相乘。
(1)LDH釋放試驗陰性對照、實驗組和陽性對照經(jīng)355μg·L-1瑞爾康處理24h，三組分別為69±2.7U·L-1、69±3.5U·L-1、282±7.2U·L-1，對NB4細胞膜完整性無影響(P＞0.05)，提示瑞爾康屬非細胞毒作用。
(2)超微電鏡和流式細胞儀(FCM)檢測瑞爾康作用NB4、MR2細胞后，細胞核邊集，濃縮，碎裂，新月體形成，呈典型凋亡狀態(tài)。瑞爾康作用36h后，MR2細胞基因DNA電泳出現(xiàn)特征性凋亡梯帶，而對照組無此現(xiàn)象；NB4細胞APO2.7蛋白表達率對照組為0.2％，355μg·L-1瑞爾康組為8.5％，提示凋亡作用。Annexin V-FITC/PI雙標準檢測NB4細胞中4區(qū)凋亡細胞比例顯著增加，對照組為0.5％，加藥組為10.4％，P＜0.005。細胞周期呈現(xiàn)各濃度瑞爾康作用NB4、MR2細胞24、36、60、72h后，均對細胞周期有影響，24h后G1期細胞減少，G2/M期細胞增多，48h出現(xiàn)凋亡，且呈時間、劑量依賴性。
(3)透射電鏡、分化抗原、NBT還原力檢測證明瑞爾對NB4和MR2細胞兼有部分誘導分化作用，CD11b表達增加，NBT還原力增強，呈劑量依賴性。
(4)凋亡機理實驗通過2048樣點基因表達譜芯片檢測，瑞爾康作用NB4細胞4h后，可使11條基因下調(diào)，2條基因上調(diào)；作用48h后，8條基因上調(diào)，33條基因下調(diào)，與細胞信號傳遞、蛋白翻譯合成、DNA結合轉(zhuǎn)錄、血管生長等基因調(diào)控誘導癌細胞凋亡有關。
(5)抗凋亡基因檢測對K562抑制率低(30.57％)的原因，經(jīng)檢測與bcl-XL抗凋亡基因高表達有關，轉(zhuǎn)染反義RNA封閉bcl-XL抗凋亡基因表達后再用瑞爾康，則可提高其敏感性。
三、藥物有效性及安全性觀察1.臨床資料對1998年3月至2003年4月隨機接診，經(jīng)骨髓、組化、免疫分型、PCR確診的急性白血病M3(APL)28例觀察。男11例，女17例，平均年齡39(9～59)歲，初發(fā)21例，維甲酸耐藥復發(fā)7例，急性早幼粒細胞白血病A型15例，急性早幼粒細胞白血病B型13例。
2.治療方法誘導緩解成人，復方瑞爾康4.5g·d-1～6.0g·d-1，分3次餐后服用，直至完全緩解(CR)。
維持治療成人，復方瑞爾康3.0g·d-1～4.5g·d-1，分3次餐后服用，維持5年。
3.結果28例APL經(jīng)復方瑞爾康治療30～60天，平均42天，緩解(CR)26/28例，占92.89％；未緩解(RN)2/28例，占7.11％。維持治療0.5年～6年，平均為3.6年，復發(fā)2/26例，占7.69％，完全緩解(CCR)24/26例，占92.31％。治療中ALT68U/L增高及皮膚色素沉著各1例，占3.5％。其余病例肝腎功、心電圖均正常，無皮膚角化及脫色，未誘發(fā)DIC。通過原子吸收光譜監(jiān)測患者血砷濃度，第3個月為3μg·L-1，1年6.3μg·L-1，均低于坤中毒的血砷濃度(0.1mg·L-1～10mg·L-1)。1例男性患者在服用復方瑞爾康5年時結婚，其愛人所生小孩健康無病，說明復方瑞爾康是一種安全、高效的抗癌藥物。
另外，本組采用化療間歇期服用復方瑞爾康，治療多發(fā)性骨髓瘤、慢性粒細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、淋巴瘤、腎癌等疾病，亦有一定療效。
復方瑞爾康治療特點適應癥廣泛，對血液腫瘤及多種實體瘤均有效，對急性白血病M3完全緩解率及長期緩解率均高達90％以上，可作為首選藥物。可通過血腦屏障，不易并發(fā)中樞神經(jīng)白血病。毒副作用輕微，不影響治療。無DIC并發(fā)癥，不引起嚴重出血。無交叉耐藥性，對維甲酸耐藥復發(fā)及難治性白血病M3亦有效。選擇性誘導瘤細胞凋亡，兼有輕度誘導分化作用，對骨髓造血無抑制作用?？砷T診治療，不需住院及化療，無痛苦，經(jīng)費低。
下表是發(fā)明人給出的復方瑞爾康治療APL療效及其效果對照。
復方瑞爾康治療APL療效及其效果對照表
權利要求
1.一種復方瑞爾康抗癌藥物，其特征在于，該復方瑞爾康抗癌藥物由純化瑞爾康及甘草組成，其配方為純化瑞爾康50％～80％；甘草20％～50％；其中，純化瑞爾康的分子式為硫化砷(AsS)92％～96％；其中As4S490％～93％；As2S32％～3％。
2.一種實現(xiàn)權利要求1所述的復方瑞爾康抗癌藥物的制備方法，包括以下步驟1)按配方取50％～80％的純化瑞爾康通過膠體磨，使雄黃膠體化，微粒直徑＜20μm；2)加入稀鹽酸浸泡24h；3)將鹽酸浸泡后的膠體化純化瑞爾康用水進行沖洗，置入恒溫干燥箱進行烘干，溫度為48℃，時間24h～48h；4)對干燥后的膠體化純化瑞爾康按配方加入20％～50％的甘草粉充分混合；5)對混合后的配料進行常規(guī)的滅菌；6)經(jīng)滅菌后的材料裝入膠囊即成。
3.如權利要求2所述的復方瑞爾康抗癌藥物的制備方法，其特征在于，所述的常規(guī)滅菌采用鈷60照射。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復方瑞爾康抗癌藥物及其制備方法，由純化瑞爾康及甘草組成，其制備方法是將純化瑞爾康通過膠體磨，使雄黃膠體化；加入稀鹽酸浸泡后用水進行沖洗并干燥，加入甘草粉，進行滅菌；然后裝入膠囊即成。本發(fā)明的復方瑞爾康治適應癥廣泛，對血液腫瘤及多種實體瘤均有效，對急性白血病M
文檔編號A61P35/00GK1528362SQ03134628
公開日2004年9月15日 申請日期2003年9月29日 優(yōu)先權日2003年9月29日
發(fā)明者劉陜西 申請人:西安交通大學
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