早上起床睜開眼
要面對一個(gè)非常殘酷的現(xiàn)實(shí)
春節(jié)假期結(jié)束了??！
真的懷疑自己是不是過了一個(gè)假年？
每天打卡的日子即將開始
2019，你有多努力，就有多幸運(yùn)
不猶豫，不彷徨，不懶惰
新的一年，朝著目標(biāo)成為最好的自己
千里之行始于足下
本期：知識大放送
細(xì)胞凋亡檢測的方法多種多樣，常用的方法包括細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察，磷脂酰絲氨酸外翻分析，檢測線粒體膜勢能，檢測片段化的DNA，Tunel法，Caspase活性檢測，凋亡相關(guān)蛋白的檢測。磷脂酰絲氨酸外翻分析，通過Annexin V和PI的聯(lián)合使用，最終可判斷細(xì)胞凋亡的各個(gè)階段，該方法被科研愛好者們廣泛使用，本期我們共同學(xué)習(xí)這種方法！
細(xì)胞凋亡示意圖（圖片來源網(wǎng)絡(luò)）
Annexin V分子量35KDa左右，是一種鈣離子依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，磷脂酰絲氨酸會(huì)從膜內(nèi)外翻，Annexin V與外翻后的磷脂酰絲氨酸具有很高的親和力，此時(shí)我們將FITC這種熒光蛋白標(biāo)記在Annexin V上，便可以利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。
PI是核酸染料，不能穿過活細(xì)胞膜，當(dāng)細(xì)胞膜出現(xiàn)破損時(shí)，PI可進(jìn)入細(xì)胞并結(jié)合核酸，Annexin V和PI聯(lián)用檢測細(xì)胞凋亡示意圖如下：
細(xì)胞消化重懸后，加入Annexin V和PI以及染色Buffer，正常細(xì)胞不會(huì)被Annexin V和PI標(biāo)記上。
早期凋亡的細(xì)胞，膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸外翻（圖中粉色結(jié)構(gòu)），此時(shí)磷脂酰絲氨酸會(huì)和Annexin V結(jié)合。
晚期凋亡的細(xì)胞，膜結(jié)構(gòu)破損，此時(shí)PI會(huì)進(jìn)入細(xì)胞，故晚期凋亡的細(xì)胞會(huì)被Annexin V和PI標(biāo)記上。
流式細(xì)胞結(jié)果分析如下（數(shù)據(jù)來源網(wǎng)絡(luò)）：
實(shí)驗(yàn)中注意事項(xiàng)：
a. 操作輕柔，減少細(xì)胞機(jī)械損傷
b. 兩種染料均屬光敏型，操作注意避光
c. 染色結(jié)束后，盡快檢測，減少信號衰減
相信通過本期的學(xué)習(xí)，您對Annexin V和PI檢測細(xì)胞凋亡有了更深刻的認(rèn)識！2019讓我們共同加油??！
羅氏Annexin V檢測細(xì)胞凋亡產(chǎn)品如下：
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