肥胖已成為全球性的重大健康問(wèn)題，是基因、環(huán)境和生活方式等多因素共同作用的結(jié)果。在引發(fā)肥胖發(fā)病的眾多因素中，過(guò)度攝入高能量食物是導(dǎo)致大多數(shù)肥胖發(fā)生的重要原因之一。利用高脂飲食長(zhǎng)期干預(yù)誘導(dǎo)的肥胖動(dòng)物模型是研究人類(lèi)肥胖發(fā)生發(fā)展規(guī)律或減肥藥物干預(yù)的較理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，多項(xiàng)研究表明，長(zhǎng)期高脂飲食干預(yù)Wistar或SD（Sprague-Dawley）大鼠可以復(fù)制出與人類(lèi)肥胖發(fā)生發(fā)展過(guò)程十分相似的肥胖表型。
Hong Lin, Yanpeng An, Huiru Tang, and Yulan Wang. Alterations of Bile Acids and Gut Microbiota in Obesity Induced by High Fat Diet in Rat Model[J]. J Agric .Food Chem. 2019, 67(13): 3624-3632.（鏈接：https://pubs.acs.org.ccindex.cn/doi/abs/10.1021/acs.jafc.9b00249）
摘要：
為了闡明肥胖發(fā)展過(guò)程膽汁酸的作用及其與腸道微生物的交互作用，研究者（博萊克技術(shù)人員參與）采用高脂飲食（HFD）在SD大鼠模型中誘導(dǎo)肥胖，收集了糞便、血漿、肝組織和腸道組織，采用UPLC-MS來(lái)定量檢測(cè)其中的膽汁酸組成和濃度，發(fā)現(xiàn)無(wú)論何種飲食方式，?；撬峤Y(jié)合的膽汁酸是肝臟中的優(yōu)勢(shì)種，而非結(jié)合的膽汁酸是血漿中的優(yōu)勢(shì)種。HFD引起總膽汁酸池的輕微增加，HFD組的血漿和肝臟組織中，DCA和TDCA顯著性增加，這與腸道組織和糞樣中DCA的增加相一致，這些變化與Blautia，Coprococcus，Intestinimonas，Lactococcus，Roseburia和Ruminococcus屬的豐度增加有關(guān)。本項(xiàng)研究揭示了肥胖發(fā)展過(guò)程中膽汁酸流及其與腸道微生物群的交互作用對(duì)健康的不利影響。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與樣品收集：
24只6周齡的SD大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組給予正常飲食而實(shí)驗(yàn)組而實(shí)驗(yàn)組給予81天的高脂飲食。收集第7、28、56和81天的糞樣以及大鼠犧牲后的肝臟、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸組織和血漿樣品。
檢測(cè)分析：
使用28種膽汁酸標(biāo)準(zhǔn)品和6種氘代內(nèi)標(biāo)，在Agilent 1290 UPLC-6460 QqQ設(shè)備上進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)和優(yōu)化，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證（線性、LOQ、穩(wěn)定性和回收率），證實(shí)檢測(cè)方法高效可靠。使用該方法對(duì)肝臟組織和糞樣進(jìn)行膽汁酸定量檢測(cè)分析。
檢測(cè)結(jié)果：
Figure 1. Bile acid compositions in (A) liver and (B) serum from rats fed with normal diet for 81 days. (C) Concentrations of TUDCA and TDCA in liver from both control (n = 12) and HFD (n = 12) groups. (D) Concentrations of DCA and iso-DCA in plasma from both control and HFD groups. Data are collected with UPLC-MS/MS method and shown as mean ± SEM in histograms (C) and (D). Asterisk (*) represents p-value <0.05; p-values were from the Student’s t test or Kruskal?Wallis test.
Figure 6. Biotransformation of bile acids in rodent. Four squares, respectively, indicate the level of specific bile acid in fecal samples at days 7, 28, 56, and 81, while the circle indicates the level of hepatic bile acids. Data are collected with UPLC-MS/MS method. Red denotes a significant increase in the HFD group (n = 12) compared with the control group (n = 12), while blue shows the decrease, black indicates no change, and white means none detected.
分析及小結(jié)：
有研究表明HFD誘導(dǎo)的肥胖及遺傳性肥胖都伴隨著宿主腸道微生物和能量獲取能力的變化，之前普遍認(rèn)為短鏈脂肪酸（SCFAs）作為微生物的專(zhuān)有代謝產(chǎn)物，在宿主-腸道微生物共代謝的過(guò)程中起了重要作用，而膽汁酸常常在共代謝研究中被忽視，僅有少量文獻(xiàn)關(guān)注血漿膽汁酸與BMI的相關(guān)性、CDCA/DCA與能量代謝過(guò)程中酶活性的相關(guān)性。
本研究發(fā)現(xiàn)了高脂飲食會(huì)使膽汁酸肝腸循環(huán)中DCA的水平增加、UDCA的水平降低，在肝臟組織和糞樣中的變化一致，DCA的產(chǎn)生是通過(guò)存在于細(xì)菌中的7α-脫氫酶催化產(chǎn)生，糞樣膽汁酸與腸道菌群的相關(guān)性分析結(jié)果也證實(shí)了這個(gè)觀點(diǎn)。除此以外，本研究還發(fā)現(xiàn)了HFD組的糞樣中結(jié)合態(tài)膽汁酸水平降低，特別是T-α-MCA，GCA，TUDCA和GCDCA，結(jié)合態(tài)膽汁酸主要起乳化劑的作用，輔助脂肪的吸收，這些膽汁酸主要是由腸道微生物水解產(chǎn)生的次級(jí)膽汁酸。結(jié)果顯示腸道厭氧類(lèi)細(xì)菌與糞樣中結(jié)合膽汁酸（TCA和GCA）呈負(fù)相關(guān)，表明腸道菌群有助于減少HDF組糞樣中的結(jié)合膽汁酸。
這些發(fā)現(xiàn)能促進(jìn)肥胖發(fā)展過(guò)程中膽汁酸和腸道微生物群的相互作用的研究，提供了一種新的研究視角。
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