來源：IVD從業(yè)者
作者：鎖炎
污染的來源
（１）試劑污染
由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣器、容器、水及其他溶液被核酸污染。
（２）設(shè)備污染
半自動核酸提取儀、全自動核酸提取儀在提取過程導(dǎo)致濺灑樣本或者核酸模板，污染機(jī)器?；蛘咴O(shè)備內(nèi)垃圾筒清潔不徹底，殘留液體或結(jié)晶揮發(fā)形成氣溶膠對造成污染。
（３）標(biāo)本交叉污染
可能是由于收集標(biāo)本的容器被污染，標(biāo)本放置時由于密封不嚴(yán)溢于容器外，容器外黏有標(biāo)本，吸樣器污染及空氣中的氣溶膠導(dǎo)致的標(biāo)本間交叉污染。尤其是病毒類可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散，導(dǎo)致彼此間的污染。
（４）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染
這是PCR中最常見的污染問題，常見于需要在擴(kuò)增后開蓋的檢測項目，或者是擴(kuò)增后產(chǎn)物處理不當(dāng)，因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染就可形成假陽性。
（５）克隆質(zhì)粒的污染
在實驗室操作中經(jīng)常會用到陽性參考品，這些陽性參考品大多數(shù)是由某些用克隆質(zhì)粒制作而成，克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用極易造成污染。
有些實驗室自己克隆質(zhì)粒做質(zhì)控品，配制過程后，垃圾的處理方式不嚴(yán)格等，從而造成質(zhì)控品對實驗室的污染進(jìn)而造成實驗室對標(biāo)本的污染。
控制污染的措施
（1）實驗分區(qū)域
合理分隔實驗室。將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行，特別注意標(biāo)本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng)與其他步驟嚴(yán)格分開。
最好能劃分：標(biāo)本處理區(qū)，PCR反應(yīng)液制備區(qū)，PCR循環(huán)擴(kuò)增區(qū)，PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實驗用品及吸樣槍應(yīng)專用。
實驗前應(yīng)將實驗室用紫外線消毒以破壞殘留的 DNA 或RNA.
(2) 各區(qū)物品不得混用
各個實驗區(qū)域要對不同設(shè)備、物品顏色有明顯的標(biāo)記，如各區(qū)域使用專門的工作服、工作鞋、垃圾桶、拖把、抹布、筆等，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。
使用一次性用具吸頭、離心管、無粉塵手套、口罩等
（3）設(shè)置規(guī)范的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)
盡可能采用全送全排空調(diào)系統(tǒng)。在進(jìn)入各個操作區(qū)域需要嚴(yán)格單一流向進(jìn)行，即試劑準(zhǔn)備和貯存區(qū)→樣品制備區(qū)→ＰＣＲ擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆行。
（4）污染監(jiān)測
設(shè)立陽性對照、陰性對照，進(jìn)行重復(fù)試驗，選擇不相同區(qū)域的引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增等，做好污染監(jiān)測，以便采取措施防止和消除污染。
（5）定期實驗室清潔
配制含有效氯 0.5% 的消毒液對設(shè)備表面、臺面、地面、物品表面、傳遞窗內(nèi)及門窗進(jìn)行擦拭，對設(shè)備內(nèi)垃圾桶進(jìn)行浸泡。
根據(jù)從上到下、從里到外的原則進(jìn)行酒精對空噴灑。
酒精擦拭（75%）移液器、八連管離心機(jī)、混勻振蕩器等小型設(shè)備。
純化水對設(shè)備表面、臺面、地面進(jìn)行擦拭，對設(shè)備垃圾桶進(jìn)行沖洗。
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