sanofi 2018Q1，top1lantus甘精胰島素，銷售額663m，長效胰島素，適應(yīng)癥I型糖尿病，能持續(xù)釋放18-26小時，預(yù)灌封包裝形式，每天皮下注射一次，300單位約180元/支，國內(nèi)主要是甘李藥業(yè)和珠海億邦制藥，150元/支，醫(yī)保目產(chǎn)品，胰島素可以說是甘李藥業(yè)的唯一產(chǎn)品，能做出來甘精胰島素并打入賽諾菲的市場還是不錯的，但是一枝獨秀肯定是不行的，如果有更新?lián)Q代的產(chǎn)品馬上就會受到巨大的沖擊，用胰島素賺的錢抓緊在胰島素方向縱深研發(fā)或者拓寬產(chǎn)品線才能持續(xù)發(fā)展。
科普一下甘精胰島素的生產(chǎn)工藝。
在胰島β細胞的細胞核中，第11對染色體段上胰島素基因區(qū)DNA向mRNA轉(zhuǎn)錄，mRNA從細胞核轉(zhuǎn)移向細胞漿的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，轉(zhuǎn)譯成由105個氨基酸殘基構(gòu)成的前胰島素原。前胰島素原經(jīng)過蛋白水解作用除其前肽，生成86個氨基酸組成的長肽鏈-胰島素原（proinsulin PI）。胰島素原進入高爾基體，經(jīng)蛋白水解酶的作用，切去31/32/60三個精氨酸連接的鏈，斷鏈生成C肽，同時生成胰島素，分泌到B細胞外，進入血液循環(huán)中。胰島素A鏈21個氨基酸，B鏈30個氨基酸，A鏈6位和11位的半胱氨酸間形成一個二硫鍵，A鏈7位和B鏈7位的半胱氨酸間形成一個二硫鍵，A鏈20位于B鏈19位的半胱氨酸間形成一個二硫鍵。
大腸桿菌屬原核生物系統(tǒng)，不會對肽鏈進行修飾，但是可以生成簡單的二硫鍵，酵母屬簡單的真核系統(tǒng)，常用表達抗體的哺乳細胞則屬于高等的真核系統(tǒng)，真核系統(tǒng)會對蛋白進行簡單的修飾，更接近人體蛋白形式，同時伴隨著生產(chǎn)效率越來越低，生產(chǎn)條件越來越苛刻。胰島素具有兩個利于通過大腸桿菌生產(chǎn)的特點，第一是翻譯以后不需要糖基化修飾，第二是是一個相對小的分子，由于C鏈的存在，使胰島素原在體外能形成天然的空間構(gòu)象，使得正確折疊率達80%。重組蛋白在宿主系統(tǒng)中高水平表達時，無論是用原核表達體系或酵母表達體系甚至高等真核表達體系，都可形成包涵體。事實上，內(nèi)源性的蛋白質(zhì)，如果表達水平過高，也會聚集形成包涵體。因此包涵體形成的原因主要是高水平表達的結(jié)果。其中大部分是克隆外源蛋白的表達產(chǎn)物，具有正確的氨基酸組成，但空間構(gòu)象大多是錯誤的，因此沒有生物活性。
甘精胰島素的A鏈21位由天冬氨酸（Asn）變?yōu)楦拾彼幔℅ly），B鏈的30位后加兩個精氨酸，賽諾菲，物質(zhì)專利US5656722，2014年到期。表達甘精胰島素的菌種是Escherichia coli(K12)，根據(jù)修改后的甘精胰島素的氨基酸序列加上合適的酶切位點后按大腸桿菌密碼子偏愛性設(shè)計DNA序列，找專業(yè)的廠家合成核苷酸序列，設(shè)計引物，進行pcr擴增，pcr產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測分離。擴增后的母的基因加到質(zhì)粒上轉(zhuǎn)入大腸桿菌進行表達，先用大腸桿菌表達含A、B、C肽的胰島素原，含二硫鍵的胰島素原形成包涵體，包涵體結(jié)構(gòu)致密，采用破碎或者高濃度的變性劑處理收集蛋白。再經(jīng)過酶切處理切去C肽，得到終產(chǎn)物甘精胰島素。中間需要經(jīng)過復(fù)雜的上游基因工程技術(shù)，和下游分離提取技術(shù)，都是常規(guī)的生產(chǎn)技術(shù)，多次試驗就可以得到優(yōu)化的參數(shù)。
甘精胰島素在中性pH條件下水溶性差，在pH4條件下完全溶解，皮下注射后酸性溶液中性化，甘精胰島素析出形成微晶形態(tài)并持續(xù)緩慢釋放使血藥濃度在24小時內(nèi)呈現(xiàn)平穩(wěn)的濃度，每ml甘精胰島素注射液含有甘精胰島素100單位（3.6378mg），10mg注射液規(guī)格含輔料30ug鋅，2.7mg間甲苯酚， 20mg85%的甘油 ，20ug聚山梨酯20，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至4.0。3ml預(yù)灌封筆芯注射液規(guī)格輔料30ug鋅，2.7mg間甲苯酚， 20mg85%的甘油，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH至4.0。
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