目前，主流的血液DNA提取方法有磁珠法和硅膠膜離心柱法，這兩種方法各有利弊。磁珠法可以針對(duì)大批量樣本的處理，滿足自動(dòng)化工作的需要，但是提取核酸純度低，提取得率低；硅膠膜離心柱法提取的核酸純度高，提取效率高，對(duì)目標(biāo)基因或DNA含量較低的樣本提取，具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)，但不易自動(dòng)化操作。一般來說，科研用戶的樣本量不會(huì)太多，首要的還是提高核酸純度和提取效率，因而科研用戶主要還是選擇離心柱法。大型醫(yī)療機(jī)構(gòu)樣本量較多，一般都會(huì)選擇自動(dòng)化的磁珠法。但一些樣本量不太多的臨床醫(yī)院或檢測(cè)機(jī)構(gòu)，出于方便和準(zhǔn)確診斷的要求，還是會(huì)選擇離心柱法。特別地，對(duì)一些低豐度樣本的檢測(cè)，最好不要用磁珠法，最好選擇離心柱法，否則可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。就離心柱法來說，目前使用較多的還是商品化試劑盒，面對(duì)眾多的品牌，如何選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的提取試劑呢？
血液核酸提取的得率要高。全血中提取基因組DNA實(shí)際上就是從有核的白細(xì)胞中提取DNA，通常利用紅細(xì)胞與白細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的差異，先使紅細(xì)胞裂解，離心后收集白細(xì)胞；再裂解白細(xì)胞，使膜蛋白和核蛋白變性，釋放出DNA，再將DNA提取出來。血液核酸提取得率的高低，對(duì)離心柱法而言，主要取決于離心柱對(duì)核酸的吸附能力和洗脫能力以及裂解液的裂解消化能力。離心柱的硅膠膜DNA吸附性能好、裂解液消化能力強(qiáng)、洗脫液洗脫能力好，血液核酸提取的得率就高。如果離心柱硅膠膜吸附能力不好，裂解液和洗脫液沒有經(jīng)過很好的優(yōu)化，血液DNA提取的得率就不高。至于血液DNA提取得率的確定，我們可以使用紫外分光光度法，但是不能作為判斷得率的唯一標(biāo)準(zhǔn)，最好還是要做個(gè)PCR或熒光定量。血液的量與提取的核酸量成正比，如果要提高血液核酸得率，可通過增加血液的量來實(shí)現(xiàn)。一般先提取200ul的全血，如結(jié)果不理想可考慮增加血液量。但如果增加血液量還不能得到滿意結(jié)果，應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的血液核酸提取試劑有Qiagen、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，Qiagen試劑盒的血液DNA提取得率，一般1ml樣本在12-45ug左右，平均在30ug。Biog比Qiagen公司的血液DNA提取得率略高，1ml血液樣本在15-48ug，平均在32ug，基本上都能滿足下游PCR實(shí)驗(yàn)的要求。
二、血液核酸提取的純度要高。一般通過測(cè)定OD260/OD280比值來估計(jì)核酸純度。一般DNA 溶液OD260/OD280比值應(yīng)在1.6--1.8之間，如果提取的DNA溶液OD260/OD280比值小于1.6，通常說明有蛋白質(zhì)或酚、多糖等的污染。如果提取的DNA溶液OD260/OD280>1.9,則表明有RNA污染。不同品牌的試劑盒提取的DNA純度略有差別，Biog的血液核酸提取純度比Qiagen略低，可以直接應(yīng)用于PCR、qPCR、病毒檢測(cè)、分子雜交等。Qiagen的純度略高，除了以上應(yīng)用，還可用于對(duì)純度要求略高的實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞轉(zhuǎn)染等。但是一般來講，目前的血液DNA提取主要應(yīng)用于基因檢測(cè)、PCR、qPCR、分子雜交等，國產(chǎn)試劑盒Biog都能滿足要求。
三、產(chǎn)品價(jià)格。價(jià)格也是選購產(chǎn)品的重要考量因素。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如PCR、qPCR、基因檢測(cè)、分子雜交等，國產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求。與國外知名品牌相比，國產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜，如Biog，價(jià)格還不到國外品牌價(jià)格的30%，性價(jià)比較高。因而，對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用Biog等國產(chǎn)試劑盒。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目，特別適合選用國產(chǎn)試劑盒。有些研究對(duì)提取DNA的純度要求相對(duì)較高，如細(xì)胞轉(zhuǎn)染等，可考慮選用Qiagen等國外知名品牌。
綜合看來，與國外知名品牌相比，國產(chǎn)試劑盒在血液DNA提取純度上略有不足，但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn)，特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類實(shí)驗(yàn)。在提取得率上，國內(nèi)試劑盒與國外品牌差別不大，而在價(jià)格方面，國產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì)。如果經(jīng)費(fèi)充足，DNA純度要求較高，可考慮選擇Qiagen等國外知名品牌。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游做PCR、qPCR、分子雜交等實(shí)驗(yàn)，可考慮選擇性價(jià)比較高的Biog等國產(chǎn)品牌。
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