謹(jǐn)以此文，紀(jì)念那些年我做過的Western blot。
—— 一位不愿透露姓名的科研民工
提起Western blot (WB)，很多人都能哭訴半宿。
這是一個基礎(chǔ)實驗，也是一個讓大家頭疼的實驗，簡稱“玄學(xué)”。
話不多說，做過的都懂。
今天給大家提供WB最全避雷手冊，希望大家能愉快實驗，順順利利。
This is the dividing line.
傾 盡 全 力，長 文 預(yù) 警
1、WB有什么優(yōu)點？
答： 靈敏，可達(dá)ng級，用ECL顯色法可達(dá)pg級。靈敏，相對便宜且特異性高。
2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒有目標(biāo)蛋白？
答：a) 你的細(xì)胞中并不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞或查文獻(xiàn)弄清楚；
b)你的細(xì)胞中的蛋白質(zhì)被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；
c) 你的抗體不能識別目的蛋白，檢查抗體說明書，看是否有問題。
3、我的細(xì)胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？
答：a)有沉淀可能因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當(dāng)提高SDS的濃度，同時將樣品煮沸時間延長，一般需96℃以上10-15min左右；
b) 也不排除你的抗原濃度過高，這時需再加入適量上樣緩沖液。
4、我做的蛋白質(zhì)分子量很小(10KD左右)，請問怎么做WB？
答：盡量選擇0.2μm的膜，縮短轉(zhuǎn)移時間；也可將兩張膜疊在一起再電轉(zhuǎn)。
5、我的目的帶很弱，怎么加強(qiáng)？
答：最主要是加大抗原上樣量；同時也可以將一抗稀釋比例上調(diào)。
6、膠片背景很臟，有什么解決方法？
答：減少抗原上樣量，降低一抗?jié)舛?，改變一抗孵育時間和溫度(盡量4℃過夜，此孵育條件比37℃1h要溫和很多)，并提高封閉液濃度。
7、目標(biāo)帶是空白，周圍有背景，是為什么？
答：你的一抗?jié)舛容^高，二抗上HRP催化活力太強(qiáng)，同時你的顯色底物處于一個臨界點，反應(yīng)時間不長，將周圍底物催化完，形成了空白即“反亮現(xiàn)象”。將一抗和二抗?jié)舛冉档?，或更換新進(jìn)口的顯色底物。
8、我的膠片是一片空白，是怎么回事？
答：如果能夠排除下面的幾個問題那么問題多半出現(xiàn)在一抗和抗原制備上。
a) 二抗的HRP 活性太強(qiáng)，將底物消耗光；
b) ECM底物中本身含雙氧水，不穩(wěn)定，見光或溫度高時易失活；現(xiàn)配現(xiàn)用。
c) ECL底物沒覆蓋到相應(yīng)位置；
d) 二抗時間過期，或平時使用不當(dāng)導(dǎo)致二抗失活。
9、我在顯影液中顯影1分鐘和5分鐘后,底片漆黑一片,是什么原因呢?
答：a) 可能是紅燈造成的, 膠片本來就被曝光了，可以在完全黑暗的情況下操作，看是否有改善.；
b) 顯影時間過長，一般3-5分鐘就夠了，特殊情況需摸索顯色時間。
10、DAB好還是ECM好？
答：DAB有毒，但是比較靈敏，是HRP最敏感的底物；ECM結(jié)果容易控制，但被催化時靈敏度差一點，但如果達(dá)到檢測的閥值，就特別靈敏，可以檢測pg級抗原。具體選擇還是要看你實驗的情況，目前大家一般使用ECM。
11、抗原檢測出的分子量比資料上的大，是怎么回事？
答：a)所檢測的抗原形成二聚體。增多巰基乙醇量，煮沸變性時間延長，可以打開二聚體。
b)蛋白本身有修飾如糖基化、磷酸化等均會增大蛋白分子量。
12、蛋白轉(zhuǎn)移不到膜上，但膠上有，同時Marker 轉(zhuǎn)上去了，為什么？
答：可能是：a)樣品濃度過低；b)轉(zhuǎn)移時間不夠。(注意！Marker并不是蛋白是否轉(zhuǎn)移到膜上的標(biāo)準(zhǔn)，它只是為我們提供簡單的指示作用。)
13、磷酸化抗體的檢測樣本制備時是否一定要加NaF等？
答：NaF是一種廣譜磷酸化酶的抑制劑，一般最好加。但是不加也可以，大部分時候是不用加的。建議可多種抑制劑混合使用。
14、要驗證某個細(xì)胞上有無該蛋白的存在，需要做免疫組化和WB試驗嗎？做這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用嗎？
答：a)免疫組化可以用來進(jìn)行定位，但是不能精確定量，而且有時會有假陽性，不易與背景區(qū)分；WB可以特異性檢測某個蛋白質(zhì)分子，如抗體選擇合適，靈敏度很高。WB進(jìn)行定量，但是不能定位。
b)兩種實驗的一抗有時候不能通用，公司的產(chǎn)品說明一般都會說明可以進(jìn)行什么實驗，在免疫組化時，是否適合石蠟切片或者冰凍切片。
15、做WB時，提取蛋白后凍存(未加蛋白酶抑制劑)，用了一抗，開始還有點痕跡，現(xiàn)在越來越差，上樣量已加到120μg，換了一種一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制劑單加PMSF行嗎？
答：懷疑是樣品問題，可能是：
a)樣品不能反復(fù)凍融，建議制備好樣品后混勻，小體積分裝；
b)樣品未加蛋白酶抑制劑。同時，建議檢查WB過程，提高一抗?jié)舛?。對于加蛋白酶抑制劑來說，一般加PMSF就可以了，最好能多加幾中種蛋白酶抑制劑(PMSF在水溶液中不穩(wěn)定，30min就會降解一半，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF，樣品處理超過1小時，補(bǔ)加1次。見水易分解，使用前加入)。
16、細(xì)胞水平要做WB，多少細(xì)胞提的蛋白夠做WB？
答：一般5×10^6就足夠了；特殊情況需根據(jù)自己的研究來確定。
17、同一樣品能同時提RNA又提蛋白么？這樣對WB有無影響？
答：能，完全沒有問題；這是兩個不同的實驗。
18、同一蛋白樣品能同時進(jìn)行兩種因子的WB檢測嗎？
答：當(dāng)然可以，有的甚至可以同時測幾十種樣品；有時如果抗體特異性高且效價高，同時使用2種一抗，可在一張膜上檢測2種不同蛋白。
19、如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？
答：如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑要溫和得多，這時最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性；部分膜蛋白不好提取，尤其是亞細(xì)胞器的膜蛋白。可考慮最新的invent柱式提取法，提取效率高，蛋白丟失較少。
20、我的樣品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在轉(zhuǎn)膜時經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)只有一部分蛋白轉(zhuǎn)到了膜上，就是在轉(zhuǎn)膜后染膠發(fā)現(xiàn)有的孔所有的蛋白條帶都在，只是顏色變淡了，有什么辦法可以解決？
答：你可以加大上樣量，沒有問題，還有轉(zhuǎn)移時你可以減少電流延長時間，加20％甲醇；還有一種辦法就是采用最新的WES來檢測，靈敏度極高，但價格貴。
21、想分離的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE電泳的分離膠濃度多大合適？積層膠的濃度又該用多少？這么大分子量的蛋白容易作WB嗎？
答：200kd的蛋白不好做，分離膠用7％，積層膠 3.5％。這種分子量蛋白建議加大電泳電轉(zhuǎn)的電場強(qiáng)度和加長作用時間，但必須控制溫度，保證低溫電泳和電轉(zhuǎn)。
22、如果上樣量超載，要用什么方法來增加上樣量？
答：可以濃縮樣品，也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超載30％是不會有問題的，建議盡量不超載加樣。如果已經(jīng)超了不少了，而且小分子量的也要，可以考慮加大膠的厚度，以增大上樣孔體積，可以試1.5mm厚的膠。
23、蛋白變性后可以存放多久？
答：-80℃，若沒有反復(fù)取出凍融，保存一兩年沒有問題。最關(guān)鍵兩條：不要被蛋白酶水解掉；不要被細(xì)菌消化掉(也是被酶水解了)。
24、我所測定的蛋白分子量是100KD左右，按理說分離膠應(yīng)當(dāng)采用7.5%，但資料卻要求分離膠和濃縮膠均采用11％的配方，不知為何？
答：上述提到的兩種凝膠均可以使用，因為105KD的蛋白在上述兩種膠的線性分辨范圍內(nèi)，但需注意目的條帶位置肯定會發(fā)生一定地偏移。
25、二抗是生物素化的抗體，三抗是親和素生物素體系，不知采用這樣的方案后，封閉液是否要作調(diào)整，能否再用5％的脫脂奶粉呢？好像有資料說脫脂奶粉會影響親和素生物素的生成，是嗎？
答：不能使用脫脂奶粉，因為脫脂奶粉中含較多的生物素，用BSA(5%、8%)代替會好一點。
26、一般一次上樣的蛋白總量是多少，跟目的蛋白的表達(dá)量有關(guān)系嗎？
答：WB一般上樣30-100μg不等，結(jié)果跟目的蛋白的表達(dá)豐度、上樣量、一二抗的量以及孵育時間都有關(guān)系，也與顯色時間長短有關(guān)。開始摸條件時，為了拿到陽性結(jié)果，各個步驟都可以量多一點時間長一點，當(dāng)然背景也就出來了。要拿到好的結(jié)果，如果抗體好的話比較容易，抗體不好的話就需要反復(fù)地試了。當(dāng)然有的蛋白不適合WB的怎樣做也不行，或者抗體效價低則注定事倍功半。
27、做組織樣品的WB的時候，怎樣處理樣品？
答：必須進(jìn)行研磨、勻漿、超聲處理(注意降溫)，蛋白質(zhì)溶解度會更好，離心要充分(12000轉(zhuǎn)/min，10-15min)。膜蛋白必須用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分步抽提(超速離心)。還有一點就是組織中的蛋白酶活性更強(qiáng)，需要注意抑制蛋白酶的活性(加入足量的PSMF)。
28、大分子量蛋白200KD或以上，在做WB要注意什么呢？
答：做200KD蛋白的WB時要注意，分離膠最好選擇>7%的；膠很軟，剝膠時要小心；轉(zhuǎn)移時間需要相應(yīng)延長(至少300mA，3h或以上)；必須要使用大量程的Marker(否則出現(xiàn)雜帶不知如何分析問題)。
29、有什么方法可以提高上樣量？
答：a)可以濃縮樣品；或增大上樣體積來增大上樣量；
b)用5X的上樣緩沖液來稀釋變性。
30、蛋白的上樣量有沒有什么具體的要求？
答：上樣量要根據(jù)實驗的要求來定，如果要求是定量和半定量的WB則上樣量要均等，如果只是要定性，則沒有太大的關(guān)系， 盡量多上就行了，但是不要超載。
31、一抗，二抗的比例是否重要？
答：比較重要，調(diào)整好一抗，二抗的比例，可以去掉大部分的非特異性底色。
32、要做磷酸化某因子WB，其二抗有何要求？
答：主要是一抗要選擇好。對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標(biāo)記的二抗。
33、免疫組化和WB可以用同一種抗體嗎？
答：免疫組化時抗體識別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇(又稱抗原表位)，有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，蛋白煮后變性其構(gòu)象會消失，僅剩下一級結(jié)構(gòu)。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸，也就是線性表位，那么這種抗體可同時用于免疫組化和Western，而如果抗體識別構(gòu)象形表位，則只能用于免疫組化。一般我們做的時候沒有這么復(fù)雜的考慮，多看看抗體說明書所注明的實驗范圍來做，這樣省時省力。
34、WB中抗體的可以重復(fù)應(yīng)用嗎？
答：所有的抗體工作溶液一般不主張回收凍存反復(fù)使用，但是如抗體比較珍貴，可反復(fù)使用2-3次。稀釋后應(yīng)在2-3天內(nèi)使用，4度保存，避免反復(fù)凍融。
35、在做WB時，PVDF膜用甲醇浸泡的目的？
答：PVDF膜用甲醇泡的目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團(tuán)，使它更容易跟帶負(fù)電的蛋白質(zhì)結(jié)合，做小分子的蛋白轉(zhuǎn)移時多加甲醇也是這個目的。
36、檢測同一抗體的磷酸化和非磷酸化的抗原可以在同一張膜上嗎？
答：肯定可以，建議先檢查非磷酸化蛋白，然后使用抗體洗脫液將抗體洗去，再在該膜上重新孵育磷酸化一抗。
37、轉(zhuǎn)膜后經(jīng)麗春紅染色的條帶，為什么大蛋白分子的一端的轉(zhuǎn)膜好象不是很好，為什么？
答：這是正常的，大分子的蛋白轉(zhuǎn)移很慢，你延長轉(zhuǎn)移時間和電流，大分子一端就會好的多，但是小分子的就有可能會變淡(轉(zhuǎn)過的表現(xiàn))。注意一點：麗春紅染色較好，不是你的目標(biāo)蛋白成功轉(zhuǎn)移至膜上的標(biāo)準(zhǔn)，這是兩個概念，；麗春紅染色很多時候只是提供一個粗略的參考而已。
38、做WB時，同樣的抗體在免疫組化能做出，而WB卻不能？
答：這多半是抗體的問題，要看抗體的說明，是否能做WesternBlot和免疫組化。
39、如果是6×8轉(zhuǎn)印膜，要加多少一抗？
答：一抗的稀釋度是有說明的，根據(jù)你的一抗看看就知道了，但是那么大的膜孵育體積一般最少為3-5ml。建議盡量還是裁剪膜，不要整張膜孵育，費(fèi)抗體而且可能會孵育不均勻(個人建議，僅供參考)。
40、上下槽緩沖液有何要求，怎樣才能達(dá)到最佳效果。
答：無特殊要求。但我們一般是上槽放新鮮的緩沖液，下槽可以是重復(fù)使用過一兩次的緩沖液；小編發(fā)現(xiàn)電泳時產(chǎn)熱也很厲害，其實可以在電泳時加冰浴。
41、跑電泳的時候配的膠總是“縮”是什么原因呢？是有的成分不對嗎？
答：沒有問題，就是你膠里的水分被電泳產(chǎn)熱蒸發(fā)了。其次配好的膠在過夜時拿保鮮膜包起來，在里面加點電泳液保持濕度就可以了；也可能30%聚丙酰胺有問題，你可以重新配制一份試試或直接買商用的30%聚丙酰胺；能夠替換的試劑，盡量換一下，選用進(jìn)口試劑。
42、蛋白質(zhì)的分子量跨度很大，如要分離小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好嗎？
答：這么廣的分布不好轉(zhuǎn)移，一般建議：21KD和66KD可以一起轉(zhuǎn)，一起做。采用12％SDS-PAGE，濕轉(zhuǎn)120mA，45-60min就可以了，可以根據(jù)你實驗室?guī)熜謳熃愕恼{(diào)節(jié)；而170KD蛋白用7%SDS-PAGE，至少200mA 120min。
43、不能很好地將大分子量蛋白轉(zhuǎn)移到膜上，轉(zhuǎn)移效率低怎么樣解決？
答：可以考慮：轉(zhuǎn)移緩沖液中加入20%甲醇(是指終濃度)，因為甲醇可降低蛋白質(zhì)洗脫效率，但可增加蛋白質(zhì)和NC膜的結(jié)合能力，甲醇可以防止凝膠變形，甲醇對高分子量蛋白質(zhì)可延長轉(zhuǎn)移時間；轉(zhuǎn)移緩沖液加入終濃度0.1%SDS，也是為了增加轉(zhuǎn)移效率；用優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)移膜，或使用小孔徑的NC膜(0.2μm)。
44、我用的是可視Marker，但是電泳總跑不全8條帶，請問什么原因？怎樣改善？膠用過8％，10％，12％，都是這樣。Marker是新買的。
答：一般來說，是小分子量Marker跑走了，增加膠濃度或減少電泳時間試試看。當(dāng)然梯度膠也是不錯的選擇，現(xiàn)在已經(jīng)有商用梯度膠了，大家可自行選擇。
45、是否WB實驗半定量一定要加內(nèi)參？
答：對于發(fā)表文章的實驗一定要加內(nèi)參，實驗嚴(yán)謹(jǐn)，證據(jù)充分。
46、核內(nèi)抗原WB內(nèi)參選擇什么合適？
答：可以選用組蛋白，組蛋白在細(xì)胞核中的表達(dá)是很穩(wěn)定的，有很多都可以當(dāng)成內(nèi)參，動動手查查就可以選出你要的內(nèi)參。(也可以私信小編哦)
47、做半定量WB，內(nèi)參β-actin，GAPDH哪個好？
答：一般選用β-actin就可以，也可以使用GAPDH，但是如果做能量、代謝這方面的研究還是盡量選擇β-actin。
48、想問一下細(xì)胞裂解液選擇蛋白酶抑制劑時有什么原則嗎？受不受組織來源的影響？胞膜和胞漿有區(qū)別嗎？
答：一般來說提取時加入廣譜的蛋白酶抑制劑就可以了，操作時保持冰浴，保持低溫。除非有文獻(xiàn)特別指明必須使用特殊方法，一般來說沒有區(qū)別。
49、轉(zhuǎn)膜后的脫脂奶粉封閉液是5%的TBST脫脂奶粉”，其中TBST的T是Tween嗎，濃度是多少？
答：T就是Tween，全稱Tris-Buffered Saline Tween-20 (TBST)，組成：8g NaCl，2.42g Tris base，加水800mL充分溶解, 加 500-1000μL 的 Tween-20，用HCl 調(diào)節(jié)pH 至 7.4，加水定容至 1L。
50、封閉，一抗，二抗時的溫度有沒有什么規(guī)定呢，比如在室溫里做，或者要在4度下?
答：均可在室溫進(jìn)行，如果時間不夠，一抗孵育可以先在室溫進(jìn)行一個小時，然后4度過夜。小編建議盡量還是4℃過夜孵育，原因在上面已說明。
51、請問一下PVDF膜和硝酸膜結(jié)合蛋白的原理是什么？
答：一般而言，硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質(zhì)相聯(lián)，這樣的話，反復(fù)洗幾次后，蛋白容易掉下來，結(jié)果較差。PVDF膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合，同時也有疏水作用，但相對較弱。這樣的話，PVDF膜和蛋白接合較牢，不易脫落，結(jié)果較好。
52、怎樣才能跑出漂亮的膠，泳道都能很直，上樣的量和灌膠是否很重要，電壓有什么要求？
答：影響跑膠跑的質(zhì)量，提供2個小建議：
a)小電壓會使膠的分子篩效應(yīng)得到充分發(fā)揮。電壓越小，條帶越漂亮，濃縮膠55V，分離膠75V就能跑得很好，但是實驗的時間會很長。
b)膠的均勻度，膠越均勻，條帶越窄，分離越均勻。倒膠之前，一定要充分混勻(不要有氣泡)，玻璃板一定要干凈，雙蒸水隔離時，一定要比較輕地加上去，避免稀釋上層的分離膠。
53、為什么提高大分子量蛋白的轉(zhuǎn)移的時候，小分子量蛋白會丟失一些哪?什么原因?
答：小分子的蛋白在轉(zhuǎn)移過程中，會透過膜去，所以大分子的上去以后，有一部分小分子的就透過去了。
54、電泳中常出現(xiàn)的一些現(xiàn)象：
①“︶” 條帶呈笑臉狀
原因：凝膠不均勻冷卻，中間冷卻不好；電泳系統(tǒng)溫度偏高，而且電場強(qiáng)度太大(電泳的電場大致呈現(xiàn)U形，所以因為趕時間而加大電壓可能會出現(xiàn)這個)。
②“︵” 條帶呈皺眉狀
原因：可能是由于裝置不合適，特別可能是凝膠和玻璃擋板底部有氣泡，或者兩邊聚合不完全。
③條帶拖尾
原因：樣品溶解不好，或存在一定程度地蛋白降解。
④紋理(縱向條紋)
原因：樣品中含有不溶性顆粒，可能抽提蛋白時出了問題。
⑤條帶偏斜
原因：電極不平衡或者加樣位置偏斜，一定要子平面臺子上電泳，膠要做好。
⑥條帶兩邊擴(kuò)散
原因：加樣量過多，彌散至孔周圍了，減少上樣量或者使用5X上樣緩沖液。
55、WB結(jié)果中背景較高
可能的原因及建議：
①膜封閉不夠，建議延長封閉的時間；選擇合適的封閉液。
②一抗稀釋度不適宜，太高，選擇最適宜的抗體稀釋度。
③ 一抗孵育的溫度偏高，建議4℃過夜孵育。
④選擇的膜容易產(chǎn)生高背景，一般NC膜的背景會比PVDF膜低，但是NC膜吸附力也就差了一點。
⑤膜在整個實驗過程中干過或手套反復(fù)接觸過，實驗過程中要注意保持膜的濕潤，使用鑷子夾取膜。
⑥檢測時曝光時間過長，可減少曝光時間。
56、WB結(jié)果中雜帶較多
可能的原因及建議：
①目的蛋白存在多個修飾位點(磷酸化位點、糖基化位點等等)，本身可以出現(xiàn)多條帶。查文獻(xiàn)或生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，去除修蛋白飾后確定蛋白實際大小，這個需要一定的生物化學(xué)基礎(chǔ)和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本，查閱文獻(xiàn)或生物信息學(xué)分析其可能性。
③樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解，加入蛋白酶抑制劑；樣本處理在冰上操作。
④上樣量過高，過于敏感，適當(dāng)減少上樣量。
⑤一抗特異性不高，重新選擇或制備高特異性的抗體。
⑥一抗不純，純化抗體。
⑦一抗或者二抗?jié)舛绕?，適當(dāng)降低抗體濃度。
57、WB結(jié)果中無信號或顯示信號弱
可能的原因及建議：
①你所檢測的樣本中不表達(dá)目的蛋白，選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，同時查閱文獻(xiàn)。
②檢測樣本低表達(dá)目的蛋白，提高上樣量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制劑。
③轉(zhuǎn)移不完全或過轉(zhuǎn)移，可以用麗春紅染膜并結(jié)合染膠(考馬斯亮藍(lán))后確定條帶是否轉(zhuǎn)至膜上或轉(zhuǎn)移過頭；適當(dāng)調(diào)整轉(zhuǎn)膜的時間和電流。
④抗體不能識別測試種屬的相關(guān)蛋白，購買抗體前應(yīng)當(dāng)認(rèn)真閱讀抗體說明書，確定其是否能夠交叉識別測試種屬的對應(yīng)蛋白。
⑤一抗孵育時間不足，建議4℃結(jié)合過夜。
⑥二抗與一抗不匹配，選擇針對一抗來源的種屬的抗體。
⑦洗膜過度，洗膜時間不宜過長，加入的去垢劑不宜過強(qiáng)或過多，建議使用0.1%的弱去垢劑Tween-20。
58、其它現(xiàn)象：
①膜上多處出現(xiàn)黑點或黑斑，原因有2點，抗體與封閉試劑發(fā)生非特異性的結(jié)合；或者配的奶粉沒有充分溶解，奶粉團(tuán)粘在膜上而沒洗干凈。
②反白(條帶顯白色)，原因一般是目的蛋白含量太高或者一抗?jié)舛绕摺?/span>
③蛋白分子量偏低或偏高，原因：膠濃度不適合，高分子量要用低濃度膠；小分子蛋白要用高濃度膠。
59、安全
愛護(hù)身體，保護(hù)自己。安全第一，實驗第二。安全無小事！操作有毒試劑時，一要定帶手套和口罩，且操作揮發(fā)性試劑一定要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。
This is the dividing line.
以上為本期內(nèi)容。簡單地為大家提供一些建議，希望大家的實驗?zāi)茼橅樌?，早日完成SCI大業(yè)!
