1. Trim28 是 TIFI 家族成員,具有 N-末端的三重模體結(jié)構(gòu),且與另一個家族成員共享主要 TIFI 信號序列,一個 HP1 領(lǐng)域,一個 PHD 的 C-末端結(jié)構(gòu)域。 Trim28 這種胚胎發(fā)育轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子會控制干細胞的染色質(zhì)組織,同時也可對干細胞自我更新進行有效控制。
2. Trim28 作為胚胎發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,可控制 DNA 損傷反應(yīng),控制細胞自我更新,同時可控制干細胞染色質(zhì)組織。同時, Trim28還有多種翻譯修飾作用,可調(diào)節(jié) Trim28 的基因功能,使其參與到細胞活動的多個方面,從而產(chǎn)生細胞因子和干細胞多能性等等。在分子
生物學(xué)研究領(lǐng)域中,基因表達和蛋白表達是非常重要的,在運用生物學(xué)相關(guān)知識的基礎(chǔ)上,可通過表達或基因沉默對一些基因和蛋白的功能性進行研究。由于在各類細胞中, Trim28 很難保持一定的穩(wěn)定性因此,在對 Trim28 進行研究的過程中建立可誘導(dǎo) Trim28 穩(wěn)定表達的
細胞系是非常必要的。
3.Trim28 又稱為 KAP1 或 TIF1β,為 TIFI 家族成員,該家族成員主要包括 TIFIα、 IFIβ、 TIFIγ、 TIFIδ。 Trim28 被認定為一種通用的轉(zhuǎn)錄共抑制因子,可對干細胞的自我更新、染色質(zhì)組織以及 DNA損傷反應(yīng)起到控制性作用,同時可起到多種翻譯后的修飾性作用,主要包括對磷酸化和 SUMO 化進行修飾。
4. Trim28(Tripartite motifprotein 28,又名Tif1β或Kap1)作為最新發(fā)現(xiàn)的肥胖“開關(guān)”基因',也可能在“胎兒程序化”改變過程中起著十分重要的作用。TRIM28是一種轉(zhuǎn)錄中介因子,在眾多基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合體中起橋梁作用,主要功能是以共抑制因子形式發(fā)揮特異的轉(zhuǎn)錄抑制作用。
5.胎兒程序化:Barker等首次提出了“胎兒程序化”(Fetal Programming)的概念,強調(diào)胚
胎時期宮內(nèi)環(huán)境的改變對胎兒生長發(fā)育程序的重新設(shè)定作用,影響胎兒的身體特性、生理機能、新陳代謝以及出生后的長期健康。也就是說,兒童青少年期及成年后肥胖、代謝性疾病等慢性疾病的發(fā)生風(fēng)險可能早在胎兒時期就已經(jīng)設(shè)定。
6.基因甲基化水平檢測:臍血的全血,提取DNA后,送北京京鴻匯盛科技有限公司,檢測TRIM38和PPARγ的甲基化水平。
7.含三方基元蛋白 28( TRIM28),又稱 KRAB 相關(guān)蛋白質(zhì) 1( KAP1),KRAB-A 相互作用蛋白質(zhì) 1( KRIP1)或轉(zhuǎn)介因子 1-β( TIF1-β),既是轉(zhuǎn)錄中介因子 1( TIF1)家族的成員之一[27],也是含三方基序的蛋白質(zhì)( TRIM)家族的成員之一[28]。
8. TRIM28 最早在 1996 年由費雷德曼團隊使用親和層析法分離出來,它的蛋白分子量約為 110kDa,可以與 KRAB 結(jié)構(gòu)域形成三元復(fù)合物,作為多種轉(zhuǎn)錄因子的輔助共抑制因子發(fā)揮作用,因此又被稱為 KAP1[29]。 TIF1 家族由四個成員組 成 ( TRIM24/TIF1-α , TRIM28/TIF1-β/KAP1 , TRIM33/TIF1-γ 和TRIM66/TIF1-δ),該家族是高度保守的 TRIM 家族(一個由 80 多種蛋白質(zhì)組成的家族,與泛素化有關(guān))的一個亞家族[30],參與核受體( NRs)的反式激活[31],也可根據(jù)細胞和信號環(huán)境的不同,被趨化到具體細胞,輔助轉(zhuǎn)錄進程或妨礙傳導(dǎo)信號[32]。此家族所有成員都有一個相似的整體結(jié)構(gòu),氨基( N)末端包含四個保守的結(jié)構(gòu)域,其中包含( RING 指, B-box 區(qū)域和 CC 區(qū)域,統(tǒng)稱為 RBCC 或 TRIM域),中心是 TSS(色氨酸和苯丙氨酸組成序列),羧基( C)端串聯(lián)植物同源域( PHD 結(jié)構(gòu)域)和溴結(jié)構(gòu)域(統(tǒng)稱 PB 結(jié)構(gòu)域) [33]。 TRIM28 與其他 TIF1 家族成員雖然在結(jié)構(gòu)上有許多相同性,但是成員之間的功能皆有差異。
9.免疫組化結(jié)果的判讀:切片免疫組化染色評價系統(tǒng)以孫微團隊[47]和劉博團隊[43]的評價標準為基礎(chǔ),分為兩個體系: 1、視野內(nèi)陽性細胞數(shù)量占比, 2、強度。原則完全遵循隨機,盲挑 5 個高倍鏡視野,在每個視野內(nèi)計算(染色陽性的細胞/視野內(nèi)細胞)%,取平均值,其中占比<10%認為是 0 分, 10%~49%認為是 1 分, 50%~74%認為是 2 分, ≥75%認為是 3 分;同時強度也分為 4 度,無明顯顯色認為是 0 分,淺黃色認為是 1 分,深黃色認為是 2 分,棕黃色認為是 3 分。
(占比 x 強度)為最終計算,總評分范圍 0~9分, ≥3 分被認定為進入高表達組。 (見表 5)。
10.TRIM28 是一種大型的多結(jié)構(gòu)域蛋白,它包含 RBCC, TSS 和 PB 等結(jié)構(gòu)域。
幾個高度保守的結(jié)構(gòu)域決定了 TRIM28 的基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制功能[27,77]。
Re27Sushma Iyengar, Farnham Peggy-J.:KAP1 Protein: An Enigmatic Master
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of the transcriptional intermediary factor 1 family[J]. Oncogene, 1999, (1
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11.TRIM28參與的疾?。褐蹦c癌、食管鱗狀細胞癌、生長發(fā)育的各個方面(DNA損傷調(diào)節(jié)、沉默逆轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制、驅(qū)動胚胎發(fā)育、干細胞重新編程控制等)、乳腺癌、肥胖、胰腺癌等各個方面。