背景技術(shù)：
非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）是世界五大鮮切花之一屬多年生宿根草本花卉。其花色繁多，花枝挺拔，花期長且不易衰敗，深受花卉種植者和消費(fèi)者喜愛，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來，隨著種植面積的不斷擴(kuò)增，非洲菊病害尤其是根腐病日益嚴(yán)重，已成為制約我國非洲菊產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要難題。
印度梨形孢宿主范圍廣、對其宿主植物具有廣泛的促進(jìn)生長和增強(qiáng)植物對生物和非生物脅迫抗性的作用。將印度梨形孢接種至非洲菊根系，利用印度梨形孢對植物的有益作用有可能是提高非洲菊根腐病抗性的有效方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種提高非洲菊根腐病抗性的方法，進(jìn)而解決生產(chǎn)上非洲菊根腐病帶來的問題。
本發(fā)明的技術(shù)方案：
一種提高非洲菊根腐病抗病性的方法，其中包括印度梨形孢發(fā)酵液的制備，非洲菊組培苗的移栽，隱地疫霉發(fā)酵液的制備，隱地疫霉接種及發(fā)病情況觀察。其特征在于，通過接種印度梨形孢提高非洲菊的根腐病抗性。本發(fā)明步驟簡單、可操作性強(qiáng)、效果顯著。
具體方法為：
（1）印度梨形孢發(fā)酵液的制備
從保存在非洲菊組培苗生根培養(yǎng)基中的印度梨形孢菌落邊緣挑取直徑為5 mm的菌塊2塊，置于PDA液體培養(yǎng)基內(nèi)，在28℃，120 r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，加水稀釋獲得孢子濃度為5×105個(gè)/ml的印度梨形孢發(fā)酵液；
（2）印度梨形孢接種及非洲菊組培苗的移栽
將生根良好的非洲菊組培苗開蓋煉苗2天后，洗凈根系，在印度梨形孢發(fā)酵液中浸泡2 h，之后移栽至基質(zhì)中；
（3）隱地疫霉發(fā)酵液的制備
活化隱地疫霉菌株，然后挑取菌落邊緣的氣生菌絲接種于PDA固體培養(yǎng)基上；于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)暗培養(yǎng)5 d，挑取菌落邊緣直徑為5 mm的菌塊2-3塊于PDA液體培養(yǎng)基內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120 r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)2天，加水稀釋獲得孢子濃度為2×105個(gè)/ml的隱地疫霉發(fā)酵液；
（4）隱地疫霉接種及發(fā)病情況觀察
將移栽1個(gè)月的接種印度梨形孢的非洲菊幼苗用刀片傷根后浸泡于隱地疫霉發(fā)酵液中2小時(shí)，取出后移栽至裝有腐殖質(zhì)的花盆中，置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強(qiáng)度為1500±200lx，光照時(shí)間為12 h/d，接種第2天開始觀察植株的發(fā)病情況，以未接種印度梨形孢的非洲菊幼苗作為對照。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
1、本發(fā)明所用印度梨形孢保存于活體植株生根培養(yǎng)基中，對宿主的定殖能力更強(qiáng)。
2、本發(fā)明可以顯著提高非洲菊根腐病抗性，具有較高的應(yīng)用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
3、本發(fā)明操作簡單，可行性強(qiáng)。
附圖說明
圖1 印度梨形孢對非洲菊根腐病抗性的影響.A：接種了印度梨形孢的非洲菊；B：未接種印度梨形孢的非洲菊。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不僅限于此。
實(shí)施例1
1、印度梨形孢發(fā)酵液的制備
從保存在非洲菊組培苗生根培養(yǎng)基中的印度梨形孢菌落邊緣挑取直徑約為5 mm的菌塊2塊，置于裝有100 ml滅菌的PDA液體培養(yǎng)基的250 ml三角瓶內(nèi)，在28℃，120 r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)3天，經(jīng)單層紗布過濾后收集濾液，加水稀釋獲得孢子濃度為5×105個(gè)/ml的印度梨形孢發(fā)酵液；
2、印度梨形孢接種及非洲菊組培苗的移栽
將生根良好的‘玲瓏’非洲菊組培苗開蓋煉苗2天后，洗凈根系，在印度梨形孢發(fā)酵液中浸泡2 h，之后移栽至基質(zhì)中；
3、隱地疫霉發(fā)酵液的制備
活化隱地疫霉菌株，然后挑取菌落邊緣菌絲接種于PDA固體培養(yǎng)基上；于28℃培養(yǎng)箱內(nèi)暗培養(yǎng)5 d，挑取菌落邊緣直徑為5 mm的菌塊3塊于裝有100 ml滅菌的PDA液體培養(yǎng)基的250 ml 三角瓶內(nèi)，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為120 r/min的搖床內(nèi)培養(yǎng)2天，加水稀釋獲得孢子濃度為2×105個(gè)/ml的隱地疫霉發(fā)酵液；
4、隱地疫霉接種及發(fā)病情況觀察
將移栽1個(gè)月的接種印度梨形孢的‘玲瓏’非洲菊幼苗用刀片傷根后浸泡于隱地疫霉發(fā)酵液中2小時(shí)，取出后移栽至裝有腐殖質(zhì)的花盆中，置于25±2℃的恒溫培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)室光照強(qiáng)度為1500±200lx，光照時(shí)間為12 h/d，接種第2天開始觀察植株的發(fā)病情況。以未接種印度梨形孢的‘玲瓏’非洲菊幼苗作為對照。
隱地疫霉侵染6天后，使用印度梨形孢發(fā)酵液處理的‘玲瓏’非洲菊生長良好（圖1A），而對照組‘玲瓏’非洲菊第2天開始出現(xiàn)輕微失水，于第6天時(shí)，葉片失水嚴(yán)重，根部腐爛脫落，植株萎蔫而死（圖1B）。
因此可以看出：印度梨形孢可以提高非洲菊根腐病的抗病性。
本發(fā)明利用浸根法獲得有印度梨形孢定殖的非洲菊，顯著提高非洲菊根腐病抗病性，對于非洲菊生產(chǎn)意義重大，具有較高的應(yīng)用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
