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新冠檢測(cè)，如何控制核酸污染

2021.02.13

來(lái)源：小桔燈網(wǎng)

臨近春節(jié)，《冬春季農(nóng)村地區(qū)新冠肺炎疫情防控工作方案》要求返鄉(xiāng)人員需持7天內(nèi)有效新冠病毒核酸檢測(cè)陰性結(jié)果返鄉(xiāng)，返鄉(xiāng)后實(shí)行14天居家健康監(jiān)測(cè)，期間不聚集、不流動(dòng)，每7天開(kāi)展一次核酸檢測(cè)。此外，醫(yī)院與食品檢測(cè)機(jī)構(gòu)也開(kāi)展了場(chǎng)地、食品、外包裝等的新冠核酸檢測(cè)，以監(jiān)控新冠傳染途徑。

在大規(guī)模新冠核酸檢測(cè)中，出現(xiàn)了少量假陽(yáng)性的誤報(bào)。這些假陽(yáng)性報(bào)告會(huì)給新冠監(jiān)控帶來(lái)錯(cuò)誤的指導(dǎo)，一旦錯(cuò)誤采取隔離/封閉措施，極大干擾相關(guān)企事業(yè)單位的正常運(yùn)營(yíng)。檢測(cè)前后及處理花費(fèi)的人力和物力也浪費(fèi)社會(huì)資源，擠占了原本可用于正確防控的資源。

這些假陽(yáng)性結(jié)果大部分是由核酸污染造成的，其來(lái)源主要有：1、PCR產(chǎn)物污染；2、克隆質(zhì)粒污染；3、樣本污染；4、試劑污染。PCR會(huì)將極少量新冠基因進(jìn)行指數(shù)復(fù)制，操作不當(dāng)時(shí)，這些被大量增值的新冠核酸會(huì)以氣溶膠形式被釋放出來(lái)，污染整個(gè)實(shí)驗(yàn)室。在進(jìn)行質(zhì)?？寺『统樘釙r(shí)，高濃度質(zhì)粒容易以氣溶膠形式污染實(shí)驗(yàn)室。采樣樣本處理/放置不當(dāng)時(shí)，被其他樣本或氣溶膠污染。檢測(cè)試劑生產(chǎn)或使用不當(dāng)時(shí)，被氣溶膠或其他方式污染。

（見(jiàn)擴(kuò)展閱讀：美國(guó)CDC檢測(cè)試劑盒污染；滅活病毒暴露污染樣本；核酸檢測(cè)氣溶膠污染）

核酸污染預(yù)防：

1、設(shè)置合理的實(shí)驗(yàn)室布局，一般可分為1）試劑準(zhǔn)備區(qū)，2）樣本制備區(qū)，3）核酸擴(kuò)增區(qū)，4）產(chǎn)物分析區(qū)，qPCR這類不需要電泳分析的可將產(chǎn)物分析區(qū)與核酸擴(kuò)增區(qū)合并。

2、每個(gè)步驟都在相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行，每個(gè)區(qū)域內(nèi)實(shí)驗(yàn)器材、物品不能共用，每個(gè)區(qū)完全隔離和獨(dú)立通風(fēng)，控制空氣流動(dòng)方向。如條件不足，也必須將擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)與試劑準(zhǔn)備和樣本制備區(qū)隔離。最后廢棄物處理區(qū)必須遠(yuǎn)離以上實(shí)驗(yàn)區(qū)。

3、實(shí)驗(yàn)人員、物料須嚴(yán)格單向流動(dòng)，即只能從準(zhǔn)備區(qū)到擴(kuò)展區(qū)和分析區(qū)，避免產(chǎn)生交叉污染。

4、定期進(jìn)行陰性質(zhì)控檢測(cè)，在大規(guī)模檢測(cè)時(shí)，必須添加陰性樣本，陰性對(duì)照品，無(wú)模板對(duì)照，保證出現(xiàn)污染時(shí)可立即發(fā)現(xiàn)。

5、使用封閉擴(kuò)增的檢測(cè)方法，如熒光定量PCR，并在擴(kuò)增完成后不能打開(kāi)試管。普通PCR和一些等溫?cái)U(kuò)增方法需要開(kāi)蓋，很容易產(chǎn)生氣溶膠污染。（Novoprotein 熒光定量PCR，Cat.E096/E094）

6、實(shí)驗(yàn)管理操作嚴(yán)格規(guī)范：在通風(fēng)櫥/超凈工作臺(tái)操作，實(shí)驗(yàn)前/后即時(shí)擦拭、清潔、消殺實(shí)驗(yàn)臺(tái)，實(shí)驗(yàn)中使用一次性手套，如有污染可能，立即替換手套，移液槍吸取液體輕柔，輕輕吹打，避免飛濺，打開(kāi)管蓋時(shí)動(dòng)作輕緩，漩渦震蕩后，離心甩下液滴。使用帶濾芯槍頭，避免液體被吸入移液槍，所有實(shí)驗(yàn)物品盡可能提前分裝成小包裝，并預(yù)先滅菌和分裝好。實(shí)驗(yàn)廢棄物統(tǒng)一處理。

7、使用dUTP+UDG酶防污染體系：在PCR中使用dUTP部分代替dTTP，使PCR產(chǎn)物中摻入U(xiǎn)。在第二次PCR擴(kuò)增前，使用UDG酶處理PCR反應(yīng)液，可打斷上一次PCR產(chǎn)物中的U，使其無(wú)法污染第二次PCR擴(kuò)增。（Novoprotein 熱敏UDG，Cat.E063）

核酸污染處理：

發(fā)現(xiàn)核酸污染，立即暫停相關(guān)實(shí)驗(yàn)/檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所、儀器設(shè)備進(jìn)行徹底的清潔/消殺/去核酸處理，更換相關(guān)試劑、耗材，實(shí)驗(yàn)人員更換衣物并進(jìn)行核酸去除。

常用的核酸污染去除方法有：紫外照射、酒精擦拭、通風(fēng)等。紫外照射可打斷核酸，但對(duì)打斷小于200bp的片段效果不佳。酒精無(wú)法消化核酸，擦拭抹去表面核酸時(shí)容易殘留。通風(fēng)可將空氣中氣溶膠排出，但無(wú)法清除表面殘留，而且需要很長(zhǎng)時(shí)間。

因傳統(tǒng)的核酸污染去除方法并不能完全去除核酸污染，《醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)工作手冊(cè)（試行）》指出，為避免氣溶膠等核酸污染造成的檢測(cè)假陽(yáng)性，可采用核酸清除劑等試劑清除實(shí)驗(yàn)室殘留核酸。

Novoprotein核酸污染去除劑（Cat.M126）降解所有核酸，完全清除掉核酸污染：

使用不同方法去除核酸污染，再進(jìn)行qPCR擴(kuò)增檢測(cè)，M126完全消除核酸

M126完全消除DNA及RNA

核酸污染是實(shí)驗(yàn)室、生產(chǎn)車間常見(jiàn)的污染事故，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室、生產(chǎn)車間封停整頓。在新冠疫情之下，每一個(gè)核酸檢測(cè)陽(yáng)性都會(huì)被極度重視，并采取更嚴(yán)格的處理措施，一旦相關(guān)單位被檢測(cè)出假陽(yáng)性，將面臨全面檢測(cè)排查和停業(yè)整頓以及人員隔離檢測(cè)，會(huì)嚴(yán)重影響相關(guān)單位的運(yùn)營(yíng)，也浪費(fèi)了疾控中心、檢測(cè)機(jī)構(gòu)、排查/隔離/封鎖單位的人力和物力。所以必須重視核酸污染，并且采取切實(shí)有效的手段預(yù)防、控制和處理核酸污染。

相關(guān)產(chǎn)品：

熒光定量試劑：E096/E094

熱敏UDG酶：E063

核酸污染清除劑：M126

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