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志賀氏菌

志賀氏菌 - 志賀氏菌屬

志賀氏菌屬是一類革蘭氏陰性桿菌,是人類細(xì)菌性痢疾最為常見的病原菌,通稱痢疾桿菌。

志賀氏菌 - 生物學(xué)特征

形態(tài)與染色

志賀氏菌

大小為0.5~0.7×2~3μm,無(wú)芽孢,無(wú)莢膜,無(wú)鞭毛。多數(shù)有菌毛。革蘭氏陰性桿菌。

培養(yǎng)特性

為兼性厭氧菌,能在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng),形成中等大小,半透明的光滑型菌落。在腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基上形成無(wú)色菌落。

生化反應(yīng)

分解葡萄糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。VP試驗(yàn)陰性,不分解尿素,不形成硫化氫,不能利用枸櫞酸鹽作為碳源。宋內(nèi)氏志賀氏菌能遲緩發(fā)酵乳糖(37℃ 3~4天)。

抗原構(gòu)造與分類

有K和O抗原而無(wú)H抗原。K抗原是自患者新分離的某些菌株的菌體表面抗原,不耐熱,加熱100℃1小時(shí)被破壞。K抗原在血清學(xué)分型上無(wú)意義,但可阻止O抗原與相應(yīng)抗血清的凝集反應(yīng)。O抗原分為群特異性抗原和型特異性抗原,前者常在幾種近似的菌種間出現(xiàn);型特異性抗原的特異性高,用物區(qū)別菌型。根據(jù)志賀氏菌抗原構(gòu)造的不同,可分為四群48個(gè)血清型(包括亞型)。

(1)A群:又稱痢疾志賀氏菌(Sh.dysenteriae),通稱志賀氏痢疾桿菌。不發(fā)酵甘露醇。有12個(gè)血清型,其中8型又分為三個(gè)亞型。

(2)B群:又稱福氏志賀氏菌(Sh.flexneri),通稱福氏痢疾桿菌。發(fā)酵甘露醇。有15個(gè)血清型(含亞型及變種),抗原構(gòu)造復(fù)雜,有群抗原和型抗原。根據(jù)型抗原的不同,分為6型,又根據(jù)群抗原的不同將型分為亞型;X、Y變種沒(méi)有特異性抗原,僅有不同的群抗原。

(3)C群:又稱鮑氏志賀氏菌(Sh.boydii),通稱鮑氏痢疾桿菌。發(fā)酵甘露醇,有18個(gè)血清型,各型間無(wú)交叉反應(yīng)。

(4)D群:又稱宋內(nèi)氏志賀氏菌(Sh.sonnei),通稱宋內(nèi)氏痢疾桿菌。發(fā)酵甘露醇,并遲緩發(fā)酵乳糖,一般需要3~4天。只有一個(gè)血清型。有兩個(gè)變異相,即Ⅰ相和Ⅱ相;Ⅰ相為S型,Ⅱ相為R型。[1]

抵抗力

本菌對(duì)理化因素的抵抗力較其他腸道桿菌為弱。對(duì)酸敏感,在外界環(huán)境中的抵抗力能以宋內(nèi)氏菌最強(qiáng),福氏菌次之,志賀氏菌最弱。一般56~60℃經(jīng)10分鐘即被殺死。在37℃水中存活20天,在冰塊中存活96天,蠅腸內(nèi)可存活9~10天,對(duì)化學(xué)消毒劑敏感,1%石炭酸15~30分鐘死亡。

變異

1.S-R型變異:宋內(nèi)氏痢疾桿菌易為R型。當(dāng)菌落變異時(shí),常伴有生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造和致病性的改變。

2.耐藥性變異:由于廣泛使抗生素,志賀氏菌的耐藥菌株不斷增加,給防治工作帶來(lái)多困難。

3.營(yíng)養(yǎng)缺陷型變異:南斯拉夫Mel(1963年)首創(chuàng)的依賴鏈霉素的志賀氏菌株(依鏈株,Sd),作為口服菌苗可預(yù)防志賀氏菌痢疾。

志賀氏菌 - 致病性與免疫性

致病性

1.侵襲力:志賀氏菌的菌毛能粘附于回腸末端和結(jié)腸粘膜的上皮細(xì)菌表面,繼而在侵襲蛋白作用下穿入上皮細(xì)胞內(nèi),一般在粘膜固有層繁殖形成感染灶。此外,凡具有K抗原的痢疾桿菌,一般致病力較強(qiáng)。

2.內(nèi)毒素:各型痢疾桿菌都具有強(qiáng)烈的內(nèi)毒素。內(nèi)毒素作用于腸壁,使其通透性增高,促進(jìn)內(nèi)毒素吸收,引起發(fā)熱,神志障礙,甚至中毒性休克等。內(nèi)毒素能破壞粘膜,形成炎癥、潰湯,出現(xiàn)典型的膿血粘液便。內(nèi)毒素還作用于腸壁植物神經(jīng)系統(tǒng),至腸功能紊亂、腸蠕動(dòng)失調(diào)和氫攣,尤其直腸括約肌痙攣?zhàn)顬槊黠@,出現(xiàn)腹痛、里急后重(頻繁便意)等癥狀。

3.外毒素:志賀氏菌A群Ⅰ型及部分2型菌株還可產(chǎn)生外毒素,稱志賀氏毒素。為蛋白質(zhì),不耐熱,75~80℃1小時(shí)被破壞。該毒素具有三種生物活性:①神經(jīng)毒性,將毒素注射家兔或小鼠,作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),引起四肢麻痹、死亡;②細(xì)胞毒性,對(duì)人肝細(xì)胞、猴腎細(xì)胞和HeLa細(xì)胞均有毒性;③腸毒性,具有類似大腸桿菌、霍亂弧菌腸毒素的活性,可以解釋疾病早期出現(xiàn)的水樣腹瀉。

所致疾病

細(xì)菌性痢疾是最常見的腸道傳染病,夏秋兩季患者最多。傳染源主要為病人和帶菌者,通過(guò)污染了痢疾桿菌的食物、飲水等經(jīng)口感染。人類對(duì)志賀氏菌易感,10~200個(gè)細(xì)菌可使10%~50%志愿者致病。一般說(shuō)來(lái),志賀氏菌所致菌痢的病情較重;宋內(nèi)氏菌引起的癥狀較輕;福氏菌介于二者之間,但排菌時(shí)間長(zhǎng),易轉(zhuǎn)為慢性。

1.急性細(xì)菌性痢疾:分為典型菌痢、非典型菌痢和中毒性菌痢三型。中毒性菌痢多見于小兒,各型痢疾桿菌都可引起。發(fā)病急,常在腹痛、腹瀉未出現(xiàn),呈現(xiàn)嚴(yán)重的全身中毒癥狀。

2.慢性細(xì)菌性痢疾:急性菌痢治療不徹底,或機(jī)體抵抗力低、營(yíng)養(yǎng)不良或伴有其他慢性病時(shí),易轉(zhuǎn)為慢性。病程多在二個(gè)月以上,遷延不愈或時(shí)愈時(shí)發(fā)。

部分患者可成為帶菌者,帶菌者不能從事飲食業(yè)、炊事及保育工作。

免疫性

病后免疫力不牢固,不能防止再感染。但同一流行期中再感染者較少,即具有型特異性免疫。痢疾桿菌菌型多,各型間無(wú)交叉免疫。機(jī)體對(duì)菌痢的免疫主要依靠腸道的局部免疫,即腸道粘膜細(xì)胞吞噬能力的增強(qiáng)和SIgA的作用。SIgA可阻止痢疾桿菌粘附到腸粘膜上皮細(xì)胞表面,病后三天左右即出現(xiàn),但維持時(shí)間短,由于痢疾桿菌不侵入血液,故血清型抗體(IgM,IgG)不能發(fā)揮作用。

志賀氏菌 - 微生物學(xué)診斷

標(biāo)本

在用藥前取糞便的膿血或粘液部分,標(biāo)本不能混有尿液。如不能及時(shí)送檢,應(yīng)將標(biāo)本保存于30%甘油緩沖鹽水或增菌培養(yǎng)液中。中毒性菌痢可取肛門拭子檢查。

分離培養(yǎng)與鑒定

志賀氏菌培養(yǎng)皿
接種腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基,37℃孵育18~24小時(shí),挑取無(wú)色半透明的可疑菌落,做生化反應(yīng)和血清學(xué)凝集試驗(yàn),確定菌群和菌型。如遇非典型菌株,須作系統(tǒng)生化反應(yīng)以確定菌屬;必要時(shí),用適量菌液接種于豚鼠結(jié)膜上,觀察24小時(shí),如有炎癥,則為有毒菌株。

快速診斷法

1.熒光菌球法:適于檢查急性菌痢的糞便標(biāo)本。將標(biāo)本接種于含有熒光素標(biāo)記的志賀氏菌免疫血清液體培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)4~8小時(shí)。如標(biāo)本中有相應(yīng)型別的痢疾桿菌,繁殖后與熒光素抗體凝集成小菌球,在低倍或高倍熒光顯微鏡下易于檢出。方法簡(jiǎn)便、快速,有一定的特異性。

2.協(xié)同凝集試驗(yàn):用志賀氏菌的IgG抗體與富含A蛋白的葡萄球菌結(jié)合,以此為試劑,測(cè)定患者糞便濾液中志賀氏菌的可溶性抗原。

志賀氏菌 - 防治原則

特異性預(yù)防主要采用口服減毒活菌苗,近年試用者有Sd株、2a變異株等。這些活菌苗雖有一定的預(yù)防作用,但免疫力弱,維持時(shí)間短,又服用量大、型間無(wú)保護(hù)性交叉免疫。故大規(guī)模應(yīng)用還受一定限制。治療可用磺胺類藥、氨芐青霉素氯霉素等。中藥黃連、黃柏、白頭翁馬齒莧等均有療效。

志賀氏菌 - 檢測(cè)最新標(biāo)準(zhǔn)

中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部2012年5月17日最新頒部了GB4789.5-2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌》,該標(biāo)準(zhǔn)于2012年7月17日起實(shí)施。該標(biāo)準(zhǔn)已將志賀氏菌增菌條件改為:樣品25g(25ml),于225ml志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素中,于41.5℃厭氧培養(yǎng)16~20小時(shí)。該標(biāo)準(zhǔn)旨在提高志賀氏菌增菌環(huán)節(jié)的選擇性,以減少雜菌競(jìng)爭(zhēng)抑制與干擾,提高志賀氏菌的擴(kuò)增量,最終提高志賀氏菌的檢出率。由于即將面對(duì)大量250ml三角燒瓶的厭氧培養(yǎng),常規(guī)的厭氧罐與厭氧袋均無(wú)法承擔(dān),故厭氧工作站(或稱厭氧培養(yǎng)箱)即成為該增菌操作的首選設(shè)備。

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