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質(zhì)粒DNA提取實驗

2018.04.04

質(zhì)粒

DNA

在我們的細胞實驗中經(jīng)常會用到質(zhì)粒DNA，那么具體是怎么來的呢？今天講的是DNA的提取步驟，各位接好了喲~~

前提

細菌繁殖步驟（挑單克隆，置于LB培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫搖床搖過夜，180-200 rpm）。

一般市面上有很多試劑盒可供大家使用，大體步驟都差不多的啦~~我按照我所使用的試劑盒（AxyPrep中抽試劑盒）的步驟分享如下：

收集

1. 50 ml離心管收集過夜搖菌的LB培養(yǎng)液（此時可以做一下判斷，如果液體未變渾濁，說明細菌并未繁殖成功，這樣肯定難以提出DNA；如果液體渾濁，便說明細菌繁殖成功啦，可繼續(xù)下面的操作）,6000 g離心8 min，棄上清。

裂解

2. 加250 μl Buffer S1 重懸細菌的沉淀，可以在渦旋儀上渦旋，使得沉淀全部重懸均勻，不留有小的菌塊。

3. 加250 μl Buffer S2，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)4-6次混合均勻使菌體充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步驟不宜超過5 min。

中和

4. 加350 μl Buffer S3，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)混合6-8次，12,000×g離心10 min。

5. 質(zhì)粒DNA制備管插到負壓裝置的接口上。吸取步驟4中的離心上清并轉(zhuǎn)移到制備管中，開啟并調(diào)節(jié)負壓至-20-30英寸汞柱，緩慢吸走管中溶液。

結(jié)合

6. 加500 μl Buffer W1，吸盡管中溶液。

7. 加700 μl Buffer W2，吸盡管中溶液；以同樣的方法再用700 μl Buffer W2 洗滌一次。

洗滌

8. 將制備管置于2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，12,000×g離心1 min。

洗脫

9. 將制備管移入新的1.5 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，在制備管膜中央加60-80 μl Eluent或去離子水，室溫靜置1 min。12,000×g離心1 min。

將Eluent或去離子水加熱至65℃將提高洗脫效率。

10. 最后去檢測其濃度即可啦。

之前也用過其他的試劑盒，步驟大同小異，根據(jù)說明書步驟操作就可以了，這個實驗比較簡單的啦。

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