血清是臨床生化檢測的重要標(biāo)本，目前主要通過采集靜脈血液待血液完全凝固后離心分離的手段來取得血清標(biāo)本。正常情況下，離體后的血液標(biāo)本需要60分鐘以上才能完全凝固，甚至不凝固，難以滿足實(shí)驗(yàn)室快速檢測的需求。這時(shí)就需要對血液標(biāo)本進(jìn)行處理以加快血液凝固的速度，常用的的促進(jìn)血液凝固的方法是在采集后的血液標(biāo)本中加入白陶土及腦磷脂等有促進(jìn)血液凝固作用的促凝劑。這些促凝劑適量加入血液后，可以為凝血因子充分提供接觸異物的活性表面激活凝血因子。
一、影響凝血效果的幾個(gè)因素：
1、凝血速度：血液凝固機(jī)制是一系列凝血因子相繼被激活，最后形成纖維蛋白凝塊的過程。含有促凝劑的真空采血管，有時(shí)會出現(xiàn)纖維蛋白析出的絲狀物、塊狀物，是因?yàn)闆]有規(guī)范化使用促凝采血管所致。在制備真空采血管選擇凝血速度過快的促凝劑會導(dǎo)致纖維蛋白收縮過快使脆弱的紅細(xì)胞碎裂而引起輕度溶血，血塊比重大于血清，所以血清在上血塊在下，此時(shí)血清下端和血球上端仍有接觸，細(xì)胞仍然可利用血清中養(yǎng)分使血糖測定值下降，乳酸脫氫酶，血清鉀測定值上升，當(dāng)使用血清分離膠促凝管時(shí)，由于分離膠比重大于血清而小于血塊，所以，上層為血清、中層為分離膠、下層為血塊，因而血清中各種成分保持著生理水平。
2、凝血溫度：血液自然凝固與溫度有關(guān)，血液在玻璃試管中在37°水浴中30min就能凝固。但是需要指出的是：如果采血后血液和促凝劑沒有充分混合時(shí)或者血液沒有完全凝固就離心，很容易形成纖維蛋白膠凍樣凝固或者纖維蛋白絲狀物其比重比血塊小，所以留在血清層，部分附著于分離膠周圍，如果此時(shí)直接上機(jī)可造成自動分析采血針的堵塞。
3、促凝劑用量：使血液達(dá)到最佳促凝效果所需加入的促凝劑的相對量。采血管公司在制備促凝劑采血管時(shí)，促凝劑噴涂不足或者配好的水溶性促凝劑當(dāng)天沒有用完，次日繼續(xù)使用而而導(dǎo)致促凝劑效力降低。血液中纖維蛋白原在促凝劑的作用下逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，如果促凝劑量不足或失效而延長了凝血時(shí)間，此時(shí)離心可導(dǎo)致纖維蛋白的析出。
4、操作是否規(guī)范：一般纖維蛋白的析出有下列原因：使用促凝采血管或者分離膠促凝采血管，要使促凝劑均勻的分布于血液中，必須輕微顛倒混合4~5次，使采血管的中央與周圍的血液同時(shí)凝固。如果血液沒有完全凝固好即離心，可造成纖維蛋白的析出。血清上部出現(xiàn)膠凍樣、碎塊樣，與血液混雜在一起。纖維蛋白絲狀物是纖維蛋白還沒有收縮完全所致。制備促凝劑真空采血管時(shí)要定量噴涂促凝劑，在小于45°C條件下吹干；如果高于50℃，促凝劑效力有下降的可能。用蒸餾水配制的促凝劑或用無水乙醇配制要有規(guī)范的質(zhì)量管理，定量噴涂促凝劑。透析患者的血液要使用含有中和肝素促凝管分離血清，才能正確分離出高質(zhì)量血清標(biāo)本。
二、凝血檢測項(xiàng)目的標(biāo)本準(zhǔn)備
1、病人自身的準(zhǔn)備及影響因素
2、標(biāo)本采集
3、標(biāo)本運(yùn)輸及儲存
4、標(biāo)本的處理
三、病人自身的準(zhǔn)備及影響因素
1、年齡：以年齡不同所確定的參考范圍解釋新生兒和嬰兒的止凝血試驗(yàn)結(jié)果非常重要，有很多學(xué)者報(bào)道了年齡與性別對血小板功能和凝血活性的影響。
2、身體狀態(tài)，疾病、月經(jīng)期、妊娠期、貧血和紅細(xì)胞增多癥等。
3、藥物：國外學(xué)者曾研究了門診病人服用藥物對臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目的影響。用一種藥時(shí),受藥物干擾的實(shí)驗(yàn)占有的百分比為7%;服用兩種藥時(shí),百分比為16.17 %;服用三種或四種藥時(shí),百分比為66.17 %;當(dāng)病人服用5種藥時(shí),受干擾的實(shí)驗(yàn)所占的百分比為100 %。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果與臨床狀態(tài)不符且患者無其它并發(fā)癥，實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控合格時(shí)，可考慮一下藥物的影響。各檢驗(yàn)結(jié)果間的相關(guān)性上鑒別，如FIB與PT、APTT和TT之間，F(xiàn)DP與D-二聚體之間存在有一定的相關(guān)性，當(dāng)這種相關(guān)性出現(xiàn)異常時(shí)，可考慮一下藥物干擾。
4、生活習(xí)慣：吸煙可使血漿纖維蛋白原、vWF和其他凝血因子水平增加，并可使凝血酶生成及血小板激活增加。
5、季節(jié)變化：清晨血小板最易激活，心肌梗死的發(fā)病率最高；寒冷季節(jié)，血凝活性增加，使心肌梗死和猝死的發(fā)病率增加。
6、ABO血型：O型血患者較其他血型患者血漿vWF和因子Ⅷ活性低。
四、標(biāo)本的采集
1、患者在采血前應(yīng)處于靜息狀態(tài)或抽血前有15-30分鐘的休息。 劇烈活動可激活血小板和凝血系統(tǒng)。
2、采血技術(shù)或采血過程的影響。采血應(yīng)做到一針見血。當(dāng)壓脈帶時(shí)間超過一分鐘，一方面引起血細(xì)胞和血凝蛋白濃度增高；另一方面可引起血凝系統(tǒng)因子Ⅷ和組織纖溶酶源激活劑（t-PA）釋放和活化。采集完畢后立即與抗凝劑混勻，同時(shí)要避免用力振搖。
3、采血的部位：標(biāo)本采集嚴(yán)禁在輸液管中采血，特別是輸入肝素時(shí)或附近進(jìn)行。
4、血凝管影響 血凝管的使用要標(biāo)準(zhǔn)化即使用硅化玻璃管，可避免內(nèi)源性接觸途徑的激活。普通玻璃管影響最大的是Ⅷ因子的活性，可使其明顯降低，要選用質(zhì)量合格的血凝管產(chǎn)品。
5、抗凝劑濃度的影響：美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）的血凝實(shí)驗(yàn)指南H21-A3推薦血凝試驗(yàn)的抗凝劑為枸櫞酸鈉，配制濃度為3.13%(0.105mol/L)或3.2%(0.109mol/L)，它能有效地阻止因子Ⅴ和Ⅷ的活化。
6、標(biāo)本顏色的影響：
實(shí)驗(yàn)表明：肝素、膽紅素、甘油三酯對試驗(yàn)均有干擾,當(dāng)血紅蛋白> 150mg/ L ,肝素> 1 mg/ L ,總膽紅素> 19.6mg/ dL ,甘油三酯> 1022mg/ dL時(shí)尤為顯著.
五、標(biāo)本的運(yùn)輸和儲存
1、標(biāo)本需要在室溫下運(yùn)送，因低溫會損傷血小板，活化因子Ⅶ和因子Ⅺ，使PT，APTT結(jié)果縮短。
2、新采集的標(biāo)本，最好在2h內(nèi)將血漿分離出來。
3、當(dāng)前不能做的標(biāo)本，冷凍在-20℃的冰箱內(nèi)。
4、需要存放較長時(shí)間的標(biāo)本冰凍存于-80℃的冰箱內(nèi)。
5、冰凍的血漿融化時(shí)不能靜置于室溫中逐漸融化，這樣會有纖維蛋白遇冷沉淀蛋白析出，應(yīng)放在37℃水浴中輕輕搖動，使其迅速溶化。
六、溫度與時(shí)間的影響：
凝血因子中，以因子Ⅴ和Ⅷ在離體后會隨時(shí)間的延長而變性失活，這種失活可隨溫度的升高而加速。從而導(dǎo)致標(biāo)本因從采集到分析時(shí)間延長而使PT和APTT時(shí)間延長。
標(biāo)本存放的溫度和時(shí)間的不同,可影響凝血因子活性。有文獻(xiàn)記載，32℃保存血漿6h、12h、24h，Ⅷ因子活性可分別消失50%、60%、95%。即使保存在4℃也分別消失5%、55%、70%。APTT在存放后檢測結(jié)果與即時(shí)測定結(jié)果相比均有延長趨勢。
有文獻(xiàn)報(bào)道Ⅴ因子活性在32℃，在6h、12h、24h分別消失25%、40%、80%,而在4℃則僅損失0%、5%、10%。
血液離體即開始變化，隨存放方式和時(shí)間不同，凝血因子逐漸消耗或激活，特別是V、Ⅷ、Ⅸ因子消耗和Ⅶ 因子的激活較為明顯.
七、標(biāo)本常見錯(cuò)誤對凝血結(jié)果的影響
1、引起凝固時(shí)間縮短的錯(cuò)誤:
（1）穿刺不熟練，多次穿刺造成組織因子釋放，觸發(fā)外源凝血途徑活化；
（2）不適當(dāng)?shù)睦鋬龊腿诮庋獫{，造成因子Ⅶ的冷激活；
（3）試管中的氣泡造成的溶血；
（4）抗凝劑的量不準(zhǔn)確。
2、引起凝固時(shí)間延長的錯(cuò)誤：
（1）標(biāo)本凝固造成凝血因子消耗；
（2）不適當(dāng)?shù)睦鋬龊腿诮庋獫{造成凝血因子的降解；
（3）抗凝劑的量不準(zhǔn)確。
3、引起APTT時(shí)間延長的錯(cuò)誤：
（1）標(biāo)本中含有肝素；
（2）標(biāo)本管未蓋塞子而導(dǎo)致CO2丟失，因而血漿pH發(fā)生改變，pH 的變化引起因子Ⅴ的變化。
4、引起APTT時(shí)間縮短的錯(cuò)誤：
（1）用玻璃管儲存血漿引起因子Ⅻ的激活；
（2）標(biāo)本針和試劑針位置偏移，位置偏移造成的樣本與試劑的量不準(zhǔn)確。
