摘要
《生物技術(shù)與實(shí)踐》高考考查的方向往往是以微生物分離、利用為情境，以實(shí)際生產(chǎn)生物為問題的載體。即如何從自然界中分離出目的菌，如何利用目的菌以用于生產(chǎn)、生活。
采樣
2018浙江11月選考：為篩選胞外α-淀粉酶分泌型菌種,一般從 C (A.果園樹下 B.肉類加工廠周圍 C.米酒廠周圍 D.枯樹周圍)獲得土樣
2019年4月選考：通常從腐爛的水果上分離產(chǎn)果膠酶的微生物，其原因除水果中果膠含量較高外，還因?yàn)?span style="font-family: 宋體;font-size: 16px;letter-spacing: 0.544px;text-align: left;text-decoration: underline;">腐爛的水果上含有產(chǎn)果膠酶的微生物多。
教材：分離以尿素為氮源的微生物，通常從動(dòng)物排泄物的地方獲得；Taq DNA聚合酶是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，最初由Saiki等從溫泉中分離的一株水生噬熱桿菌中提取獲得。
小結(jié)：想要獲得某種菌，往往從其生活的特定環(huán)境下采樣。
富集培養(yǎng)
.(2017江蘇單科,31,7分)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)如圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請(qǐng)回答下列問題:
（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作為碳源的有蛋白胨、苯酚
（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸 增加 ,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。
分離、篩選
3.1 單菌落分離
劃線分離和涂布分離都是分離單菌落的方法，但是應(yīng)用場景不同。比如從土壤樣液中分離出某種目的菌時(shí)，往往用稀釋涂布分離，因?yàn)槟康木谕寥乐兴嫉谋壤^少，劃線分離不容易分離出單菌落。
若保存的菌種被雜菌污染，往往用劃線分離分離出單菌落，再進(jìn)行培養(yǎng)并保存菌種，因?yàn)槟康木嫉谋壤螅菀追蛛x出目的菌。另外劃線分離法獲得產(chǎn)物表達(dá)能力高的菌株，如在培養(yǎng)基中加入一定量的氨芐青霉素，由于非工程菌和其他雜菌都沒有抗性基因，所以在 劃線后只有存在抗性基因的工程菌能生存下來。
當(dāng)然也沒有嚴(yán)格的區(qū)別，對(duì)于高考而言，兩種分離方法基本上都適用，但是若題目中出現(xiàn)稀釋或者表現(xiàn)為涂布分離的菌落特征，就另當(dāng)別論了。
2018年4月浙江：（2）在淀粉分離生產(chǎn)工藝研究中，為促進(jìn)淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝劑（乳酸菌菌液），其菌株起重要作用。為了消除絮凝劑中的雜菌，通常將生產(chǎn)上使用的菌液，采用_劃線分離法(或涂布分離法)，進(jìn)行單菌落分離，然后將其擴(kuò)大培養(yǎng)，并進(jìn)行特性鑒定，篩選得到純的菌株。
2019年4月32浙江 ：為了獲得高產(chǎn)果膠酶微生物的單菌落，通常對(duì)分離或誘變后的微生物懸液進(jìn)行 涂布分離或劃線分離。
2019課標(biāo)全國Ⅰ,37 ：Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基,若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),接種時(shí),應(yīng)采用的方法是稀釋涂布平板法。
3.2 篩、選
往往利用選擇培養(yǎng)基“篩”出目的菌，例如教材中用尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩出利用尿素的微生物，根據(jù)環(huán)帶直徑與菌落直徑比值的大小，選出產(chǎn)脲酶的量多和活性大的目的菌。
2015浙江自選,17：（1）土壤懸液首先經(jīng)80 ℃處理15分鐘,其目的是篩選出耐高溫的菌株。
2018浙江11月選考：涂布到含有淀粉的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng),一段時(shí)間后在培養(yǎng)基表面滴加碘液,可在菌落周圍觀察到水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種,需挑選若干個(gè) 水解圈直徑與菌落直徑 比值大的菌落,分別利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)增。
2020年1月浙江29題：從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌，首先對(duì)經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進(jìn)行過濾，然后，取濾液進(jìn)行稀釋，再用涂布分離的方法在某種含牛乳的專用的培養(yǎng)基中進(jìn)行初步篩選。(4)自然界中醋桿菌常與乳酸菌共同生長。若要篩選出醋桿菌，則其專用的培養(yǎng)基中應(yīng)添加乙醇。
擴(kuò)大培養(yǎng)與應(yīng)用
2015浙江自選,17：（3）篩選獲得的菌株經(jīng)鑒定后,將優(yōu)良菌株進(jìn)行液體擴(kuò)大培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)需要振蕩,其主要目的是供氧。
擴(kuò)大培養(yǎng)獲得大量的目的菌。以此獲得大量的酶，酶有胞內(nèi)酶和胞外酶。若是胞外酶可以從目的菌培養(yǎng)液中獲得；若是胞內(nèi)酶需要對(duì)目的菌進(jìn)行裂解。 酶還可以與酶的固定化相聯(lián)系。這樣就拓展了考查的范圍
寫在最后
1、在微生物的分離和培養(yǎng)中，需要根據(jù)微生物的特性制定特定的培養(yǎng)基。因此培養(yǎng)基的成分及其作用也是高考考查方向之一。
2、在微生物的分離和培養(yǎng)中，需要無菌條件。在復(fù)習(xí)時(shí)和學(xué)生一起分析，（1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料的特性選擇合適的滅菌方法；（2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)的時(shí)間順序，進(jìn)行分析如何滅菌，比如實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中、實(shí)驗(yàn)后的操作過程。
3、上面論述是高考中常見的出題思路，也是實(shí)際應(yīng)用的中一般操作步驟。當(dāng)然限于考試的分值，每次考查的考點(diǎn)不會(huì)面面俱到，但是基本上都在其中。
4、小編水平有限，敬請(qǐng)批評(píng)指正，歡迎留言，不勝感激！
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