（第1部分：培養(yǎng)基配制）
廣東省藥檢所對(duì)《中國藥典》2010版微生物專題培訓(xùn)班的有關(guān)問題解答答案。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120415/3980531/
1.含瓊脂培養(yǎng)基冷卻至25℃后已凝固，如何測(cè)定其pH？
答：有專門的固體培養(yǎng)基pH計(jì)，如Radiometer A /S, DK22400 Copen2 hagen NV, Denmark 或者M(jìn)icroelectrodes Inc1, NH 03053,U1S1A1 。".
2..PH計(jì)測(cè)培養(yǎng)基的PH好像有比較大的差別，應(yīng)如何選擇PH計(jì)？（效價(jià)7.8的培養(yǎng)基我用普通理化室的PH計(jì)測(cè)定只有7.0左右，不知道是否因?yàn)樵诟邷叵聹y(cè)定（含瓊脂）
答：培養(yǎng)基應(yīng)冷卻到20℃～25℃才可測(cè)量，另外PH計(jì)應(yīng)按時(shí)校準(zhǔn)。
3.生物指示劑對(duì)滅菌設(shè)備的性能，滅菌程序的驗(yàn)證是只驗(yàn)證一次呢，而后進(jìn)行定期驗(yàn)證，如果生物指示劑換批號(hào)，是否要重新驗(yàn)證？
答：應(yīng)定期或不定期驗(yàn)證一次，確保滅菌設(shè)備正常。生物指示劑更換批號(hào)，不需重新驗(yàn)證。
4..紫外線滅菌后，需要多久進(jìn)去操作？
答：打開通風(fēng)凈化設(shè)備，半小時(shí)后可入內(nèi)操作。
5.孟加拉培養(yǎng)基是否可以取代玫瑰紅鈉瓊脂進(jìn)行培養(yǎng)霉菌和酵母菌？
答：根據(jù)中國藥典，采用玫瑰紅鈉瓊脂。
6.配制PH值7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液時(shí)有時(shí)因?yàn)楦邏簻缇鳒缇^程溫度過高而導(dǎo)致培養(yǎng)基混濁了，這種情況緩沖液還能用嗎？
答：建議按正常溫度滅菌，混濁培養(yǎng)基建議不要使用。
7.培養(yǎng)基在冷藏中形成結(jié)晶怎么處理？①銷毀 ②加熱再用 ③待冷卻完用。
答：建議不要使用
8.融化的培養(yǎng)基為什么不能再冷水中冷卻？
答：防止受熱不均引起結(jié)塊
9.取菌后測(cè)PH：（25℃）培養(yǎng)基配制好測(cè)PH，取其中一瓶測(cè)PH，那這一瓶測(cè)完就不能用了，污染了。
答：也可在無菌條件下取出適量測(cè)pH.
10.配制分裝過程中能否使用不銹鋼鍋？
答：我實(shí)驗(yàn)室使用不銹鋼鍋，目前未發(fā)現(xiàn)異常。
11. 對(duì)新購進(jìn)無菌0.9%氯化鈉（500ml）能否再次滅菌？
答：能。但包裝完好，購入時(shí)間較短的無需滅菌。
12.“要定期對(duì)壓力表進(jìn)行檢定（消毒鍋），檢定周期一般為半年”，這句話怎樣理解，是廠家應(yīng)半年自己檢一次，還是有計(jì)量部門執(zhí)行？
答：由計(jì)量部門計(jì)量，計(jì)量后應(yīng)發(fā)有檢定證書。
13. 滅菌后，滅菌鍋需自然冷卻降壓才可以打開，這段時(shí)間是否會(huì)造成過度滅菌。
答：自然冷卻過程已經(jīng)計(jì)算在正常滅菌時(shí)間內(nèi)了，不會(huì)造成過度滅菌。
14. 培養(yǎng)基常規(guī)質(zhì)控有無強(qiáng)制檢定項(xiàng)目？目前我們所做項(xiàng)目有：ph、無菌檢查、生長(zhǎng)檢查、是否符合藥典規(guī)定？
答：培養(yǎng)基應(yīng)按2010版藥典檢查。
15. 培養(yǎng)基所用器具若使用濕熱滅菌，是否必須待干燥后才可以使用？若烘干或其它方法，中間過程怎樣防止微生物污染？
答：答：如果是馬上使用且不是用于非水溶性供試液的制備及實(shí)驗(yàn)，不一定要烘干；否則，應(yīng)干燥后使用，滅菌及干燥盡量在同一鍋里進(jìn)行，或用紗布和牛皮紙包扎緊密。
16. 培養(yǎng)基的避光儲(chǔ)存，是否配置好的培養(yǎng)基其全部放避光儲(chǔ)存？
答：最好都避光保存。無條件時(shí)，光敏感的培養(yǎng)基一定要。
17. 商品培養(yǎng)基干粉說是加蒸餾水溶解，實(shí)際操作是否可以用純化水或注射用水？
答：只要不含有任何可能抑制或影響微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)的水均可。
18. 滅菌后的培養(yǎng)基是否都要測(cè)ph值？如何測(cè)定ph值？
答：每個(gè)制備批次的培養(yǎng)基都應(yīng)測(cè)定ph，可采用ph試紙或ph計(jì)測(cè)量。
19. 培養(yǎng)基及器具滅菌可否同一設(shè)備同滅菌時(shí)間進(jìn)行滅菌？答：最好分開滅菌，條件不允許時(shí)可同爐滅菌，前提是都是潔凈無污染的。
20. 培養(yǎng)基的保溫能否用60℃的培養(yǎng)箱，它與45℃—55℃水浴鍋保溫方法有何不同？
答：不建議，因?yàn)闇囟炔煌?，長(zhǎng)時(shí)間高溫影響培養(yǎng)基質(zhì)量。
21. 培養(yǎng)基的貯存是否需要放置于2—10℃冰箱內(nèi)？
答：需冷藏保存的培養(yǎng)基外包裝上會(huì)寫明。
22. 培養(yǎng)基滅菌后成份會(huì)有所蒸發(fā)減少，如何處理這個(gè)問題？答：正常情況下蒸發(fā)量較少，可忽略不計(jì)。
23. 培養(yǎng)基融化后出現(xiàn)渾濁是有哪些方面的原因引起的？應(yīng)如何避免？
答：可能的情況有1培養(yǎng)基配置用水不符合規(guī)定；2滅菌過程溫度升溫慢或降溫慢；3培養(yǎng)基儲(chǔ)存不當(dāng)；4融化時(shí)沸騰時(shí)間較長(zhǎng)等。
24. 準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基有效期如何驗(yàn)證？
答：定期取出培養(yǎng)基驗(yàn)證其無菌性，促生長(zhǎng)能力等方面。
25. 某些培養(yǎng)基無pH變化范圍，應(yīng)該怎么確定該培養(yǎng)基的pH范圍呢？
答：向培養(yǎng)基供應(yīng)商索取。
26. 用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)時(shí)間如何確定？
答：與正常實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)一樣。
27. 培養(yǎng)基加熱的溫度一般超過100℃，是否符合要求？有無時(shí)間限制？
答：答：是指哪個(gè)環(huán)節(jié)？培養(yǎng)基滅菌溫度規(guī)定是超過100℃，有具體的時(shí)間要求，如果是指固體培養(yǎng)基使用前的加熱熔化，則完全融化即可，避免長(zhǎng)時(shí)間高溫加熱。
28. "培養(yǎng)基瓶的裝量,例：瓶裝量是500ml/瓶，裝量超過500ml/每瓶是否可行？
答：培養(yǎng)基的分裝量不得超過容器的2/3。"
29. 同一批培養(yǎng)基代表同一批號(hào)生產(chǎn)的培養(yǎng)基嗎？
答：是。
30. 培養(yǎng)基配制好滅菌后，在高壓容器中保溫降至50℃左右，可不可行？
答：建議最好不要，避免過度受熱。
31. 脫水培養(yǎng)基對(duì)濕度是否有要求？多少適宜？
答：按要求陰涼干燥環(huán)境儲(chǔ)存即可。
32. 對(duì)照培養(yǎng)基何時(shí)能購買？
答：已經(jīng)陸續(xù)開始銷售。
33. 培養(yǎng)基pH值測(cè)定溫度在25℃，這個(gè)溫度應(yīng)怎么控制？比如固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基使用過程中還能調(diào)節(jié)pH值嗎？
答：可水浴控制培養(yǎng)基溫度。
34. 配制培養(yǎng)基過程中，按說明書稱定量，加規(guī)定的純化水，煮沸溶解，為了避免煮沸過程總減少水分，是否要在配制過程適當(dāng)增加水?比如陪硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基.
答：可適量增加，自己掌握。
35. 商品培養(yǎng)基可否按照使用者驗(yàn)證的參數(shù)滅菌？
答：理論上可以，請(qǐng)自行掌握。
36. 商品培養(yǎng)基一定要當(dāng)天配當(dāng)天用嗎？可否在一周內(nèi)用完？
答：不是即配即用的培養(yǎng)基的話，儲(chǔ)存的當(dāng)，可以使用。
37. 稱量培養(yǎng)基時(shí)，注意不要吸入粉末，這粉末是指何物？
答：就是你所稱量的干粉培養(yǎng)基
38. 從中檢所購買的培養(yǎng)基還需要做適用性檢查嗎？
答：因?yàn)橐彩谴笈可a(chǎn)的商業(yè)化培養(yǎng)基，應(yīng)該做適用性檢查。
39. 若商品化的脫水培養(yǎng)基說明書上的處方與藥典上的標(biāo)示的處方不符的，不能用嗎？
答：不能。
10. 用于調(diào)pH值用的酸、堿溶液經(jīng)滅菌后會(huì)對(duì)Hcl溶液，NaOH溶液發(fā)生物理、化學(xué)變化嗎？如果有變化影響，會(huì)影響到所調(diào)培養(yǎng)基的質(zhì)量嗎？
答：理論上會(huì)，但未經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)。
41. 如果購買的預(yù)灌裝培養(yǎng)基，是否需要做培養(yǎng)基靈敏度？答：需要。
42. 購買回來的培養(yǎng)基有幾個(gè)批號(hào)，那么適用性檢查是只需做一次？還是每個(gè)批號(hào)都需做?
答：每批都需做
43. 如果不同次買回來的培養(yǎng)基是同一批號(hào)，是否后面買回來的培養(yǎng)基不需要做適用性檢查?
答：最好做
44. 如果配制和滅菌過程沒有驗(yàn)證，是否每一次配制培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行適用性檢查？
答：是。
45. 生物指示劑菌片濃度液如何進(jìn)行復(fù)核？才可確認(rèn)所購買生物指示劑菌片濃度符合要求.
答：我所未使用該產(chǎn)品，無此方面經(jīng)驗(yàn)。
46. 紫外燈的使用期限，怎么規(guī)定，通常多長(zhǎng)時(shí)間更換紫外燈？
答：每種型號(hào)的使用壽命不相同，有1000小時(shí)、1500小時(shí)、2000小時(shí)等，買來時(shí)應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書。
47. 培養(yǎng)基滅菌，若規(guī)定為121℃15分鐘，實(shí)際操作為（121 2）℃，（15 3）分鐘，這樣可取嗎？是否只能按照培養(yǎng)基配制121℃15分鐘說明來配制？
答：建議按照規(guī)定時(shí)間進(jìn)行滅菌。
48. 培養(yǎng)基的滅菌程序如何驗(yàn)證？
答：可采用生物指示劑進(jìn)行驗(yàn)證。
49. 煮培養(yǎng)基，用不銹鋼鍋在電磁爐上煮可行？硫乙醇培養(yǎng)基是否要煮沸？如何煮沸？用不銹鋼鍋在電磁爐上煮沸可行嗎？可不可以水浴煮沸呢？
答：硫乙醇應(yīng)煮沸，量大時(shí)，我實(shí)驗(yàn)室用不銹鋼鍋在電磁爐上煮沸。
50. 從中檢所購買的培養(yǎng)基還需要做適用性檢查嗎？
答：因?yàn)橐彩谴笈可a(chǎn)的商業(yè)化培養(yǎng)基，必須做。
51. 在滅菌條的效力驗(yàn)證時(shí)選取微生物指示劑，由于我公司產(chǎn)品品種多，同一種微生物指示劑又存在著在不同介質(zhì)中耐熱性（D值）不同，那應(yīng)如何測(cè)定某微生物指示劑在某一介質(zhì)耐熱性（D值）呢？應(yīng)如何選取最適宜的微生物指示劑呢？答：選擇生物指示劑，應(yīng)以所選用的滅菌方法向?qū)?yīng)。
58. 各種成品培養(yǎng)基要求的滅菌溫度與時(shí)間不一樣，做滅菌鍋的驗(yàn)證應(yīng)該如何確定溫度和時(shí)間？
答：我們未遇此種情況，但認(rèn)為應(yīng)按照最低溫度和最短時(shí)間進(jìn)行驗(yàn)證。
52. 瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，但現(xiàn)有規(guī)定要求培養(yǎng)基需要經(jīng)適用性檢查后才可使用，時(shí)間上的沖突如何解決？
答：一個(gè)批次的培養(yǎng)基做一次適用性檢查即可，以后再使用時(shí)可現(xiàn)配現(xiàn)用。
53. 培養(yǎng)基（微生物限度用）是否需作無菌性檢查？若培養(yǎng)基還需作陽性生長(zhǎng)試驗(yàn)，那么無菌檢查與陽性檢查是否應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行？
答：按藥典規(guī)定進(jìn)行驗(yàn)證。陽性應(yīng)在專門區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。
54. 是不是有一種1ml的沙土培養(yǎng)管（用來傳代接種），在哪里可以買到？
答：我們未用過，不清楚如何購買。
55. 固體培養(yǎng)基能存多久？（已滅菌的）融化的培養(yǎng)基在水浴中不超8小時(shí)，而它呢？
答：視培養(yǎng)基種類而定，不可一概而論。
56. 可否使用紫外線強(qiáng)度指示卡來檢測(cè)紫外燈是否需要更換？
答：我們未用過紫外線強(qiáng)度指示卡，我們了解有一種紫外線強(qiáng)度檢測(cè)儀大概可以滿足你們的要求。
57. 如培養(yǎng)基在高壓滅菌器中溫度需自然下降20度才開蓋嗎？
答：高溫滅菌器有安全閥，溫度下降到安全閥可打開時(shí)將培養(yǎng)基取出室溫冷卻，各型號(hào)滅菌器安全開蓋溫度不盡相同。
58. 稀釋液滅菌后ph值是否有變化？有何影響？（如ph7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液，ph6.8無菌磷酸鹽緩沖液）
答：一般pH有下降現(xiàn)象，約0.2左右，不同培養(yǎng)基pH變化可能不同。
59. 省所能否幫企業(yè)代購“對(duì)照培養(yǎng)基”？如能，如何聯(lián)系？
60. 對(duì)照培養(yǎng)基在省所可以買到嗎？
答：中檢所已經(jīng)陸續(xù)開售，請(qǐng)與我所業(yè)務(wù)科直接聯(lián)系（020-81854392）。
61. 按要求每批培養(yǎng)基要做系統(tǒng)適用性驗(yàn)證，下面分所或廠家如直接從省所購買，省所買回來的時(shí)候肯定每批已已驗(yàn)證了，那下面分所還要做驗(yàn)證的話，那不就大大的浪費(fèi)人力、財(cái)力、物力?？煞袷∷忂M(jìn)的不驗(yàn)證或提供驗(yàn)證報(bào)告？
答：各實(shí)驗(yàn)室配制培養(yǎng)基的程序不同，必須自己做驗(yàn)證。
62. 有些培養(yǎng)基要用到梭菌等，下面所可能一兩年也沒檢測(cè)陰道內(nèi)用藥，也很少用到這個(gè)菌，按驗(yàn)證要求，就得把各種菌買回去，還得花很多時(shí)間去維護(hù)、保管、傳代等，下面有些藥廠這方面的人才就更加稀缺，這就逼得很多廠家為了應(yīng)付檢查做更多的假記錄或買N支菌回來這只是為了應(yīng)付檢查。答：這種情況我們能理解，但是還請(qǐng)按照藥典規(guī)定處理吧。
63. 配好的MUG有沒有要求多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)要使用完？可以一次過配很多，用上幾個(gè)星期？
答：請(qǐng)按藥典中對(duì)培養(yǎng)基的一般要求操作。
64. 配好的靛基質(zhì)有沒有要求多長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)要使用完？可以一次過配很多，用上幾個(gè)星期？
答：請(qǐng)放冰箱保存，我們的經(jīng)驗(yàn)可使用一到兩個(gè)月。
65. 對(duì)照培養(yǎng)基中檢所還是沒有賣，在10月1日未買到對(duì)照培養(yǎng)基之前，可否沿用05版藥典來確認(rèn)培養(yǎng)基適用性？
答：在未買到之前，請(qǐng)盡量購買有資質(zhì)的品牌培養(yǎng)基。盡快按10版執(zhí)行。
66. 大腸埃希菌檢查時(shí)，MUG培養(yǎng)基必須在5小時(shí)和24小時(shí)，兩個(gè)時(shí)間段做觀察？還是選其中一個(gè)適應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)作觀察好？
答：如5小時(shí)可以明顯觀察到結(jié)果，就可做進(jìn)一步檢查。
67. 我公司是生產(chǎn)大容量注射液的，由于國家對(duì)滅菌效力F0值的要求不斷提高，結(jié)合我公司現(xiàn)行滅菌條件所達(dá)到的F0值不高，故必須進(jìn)行滅菌工藝變更，在滅菌工藝變更中，需做滅菌效力驗(yàn)證，需選取適宜的微生物指示劑。但由于我公司品種較多，同一微生物指示劑在不同品種藥液中會(huì)有不同的耐熱性（D值），這影響到我公司對(duì)微生物指示劑的選取，請(qǐng)問國內(nèi)對(duì)耐熱性較高的微生物指示劑的耐熱性測(cè)定是怎樣的辦法？
答：我們未做過此類研究，請(qǐng)咨詢相關(guān)產(chǎn)品公司。
2010版中國藥典培訓(xùn)回答（第2部分：微生物限度）
廣東省藥檢所對(duì)《中國藥典》2010版微生物專題培訓(xùn)班的有關(guān)問題解答答案。
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1、微生物方法驗(yàn)證，要求菌株回收率≧70%，是否有上限要求？（如不得高于100%或者110%）。
答：沒有上限。但一般不會(huì)高于100%，因?yàn)榧舆M(jìn)去的菌量是一樣的，如果超過100%可看成是操作上的誤差。按微生物的特性，如果不超過太多，是可以接受的，但沒有具體上限。（本所控制在110%以內(nèi)）。
2、在微生物方法驗(yàn)證時(shí)，霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證只用黑曲霉及白色念珠菌做方法學(xué)驗(yàn)證，在操作培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)：在玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)生長(zhǎng)的白色念珠菌的形態(tài)太小與營養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)的細(xì)菌的某些形態(tài)大小相同，這樣如何判斷營養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)的菌落是否是白色念珠菌？為何這兩種菌落形態(tài)相似？
答：菌落形態(tài)相似不等于就是同一種菌。在驗(yàn)證時(shí)，營養(yǎng)瓊脂的驗(yàn)證菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌，如果本底菌為0，則營養(yǎng)瓊脂上長(zhǎng)的菌應(yīng)該不是白色念珠菌。要判斷是否為白色念珠菌，應(yīng)進(jìn)行白色念珠菌的相應(yīng)鑒定方法后才能確定。任何微生物都不可能只是從菌落就可以進(jìn)行判斷，只能判斷為疑似，然后再做一系列相應(yīng)的鑒定實(shí)驗(yàn)后才能進(jìn)行判斷。
3、生孢梭菌的適宜計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基？（很多驗(yàn)證需對(duì)生孢梭菌進(jìn)行計(jì)數(shù)）
答：最簡(jiǎn)便的方法是用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基上層為含氧層，適宜需氧菌生長(zhǎng)，下層為厭氧層（下層高度最好7cm以上），適宜厭氧菌生長(zhǎng)。在培養(yǎng)16~18小時(shí)這個(gè)時(shí)間進(jìn)行觀察，計(jì)數(shù)，超過20小時(shí),由于繁殖量大，培養(yǎng)基將混濁，點(diǎn)計(jì)不清?；蛘呤怯酶鐐惐葋啳傊囵B(yǎng)基，澆注后，置厭氧罐（袋）里，再置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。
4、微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)，請(qǐng)問這些培養(yǎng)基還需要做無菌檢查試驗(yàn)嗎？
答：微生物限度檢查，藥典上沒有特別說明對(duì)培養(yǎng)基作無菌性檢查，但每次都要做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，陰性對(duì)照是檢查整個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)是否被微生物污染，實(shí)際上也包括了培養(yǎng)基的無菌性檢查。
5、微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基如：營養(yǎng)瓊脂、EMB、Macl等培養(yǎng)基其分裝容器需要預(yù)先滅菌嗎？
答：不用。只要是潔凈的就行，因?yàn)榉盅b后還要滅菌。
6、具有抑菌性的供試品，細(xì)菌、霉菌、都是用薄膜過濾法來檢查的，那么沙門菌可以用常規(guī)法來檢查嗎？就是可以不經(jīng)過過濾直接接種到營養(yǎng)肉湯中嗎？
答：這要看你驗(yàn)證的結(jié)果。如果通過驗(yàn)證，你的品種是對(duì)沙門菌有抑制作用，且用培養(yǎng)基稀釋法不能消除其抑菌性，則就必需考慮用薄膜過濾法。
7、微生物限度檢查中，稀釋劑對(duì)照組，是在稀釋液中加入50~100cfu的菌，還是把稀釋液制成含量50~100cfu的濃度呢？
答：是把稀釋液制成含50~100cfu/ml菌的濃度。（在這里，我對(duì)上次講課時(shí)關(guān)于稀釋劑對(duì)照組操作的PPT進(jìn)行糾正，對(duì)于離心薄膜過濾法的稀釋劑對(duì)照組的操作應(yīng)該是：含50~100cfu/ml菌的稀釋液 離心 取稀釋液（與試驗(yàn)組同樣取上層液） 過濾、沖洗 貼平板）
8、稀釋級(jí)對(duì)照組:含50~100cfu/ml菌稀釋液→離心→取供試液稀釋液過濾、沖洗→貼平板。這里需要加供試液?jiǎn)幔渴欠駪?yīng)為上述離心后的菌液？答：不需要取供試液，只取“上述離心后的菌液”。關(guān)于這一情況，我在第7題里已經(jīng)作了說明。
9、當(dāng)要做稀釋劑對(duì)照組時(shí)，是否就是從制備供試品時(shí)就同時(shí)做一份不含供試品而是含菌50~100cfu的樣品？等于按同一個(gè)方法制備一個(gè)供試品，五個(gè)含菌稀釋液對(duì)照組？
答：是的。
10、菌落計(jì)數(shù)是否需要將每天計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)登記在記錄本上，是否可以只記錄最終的數(shù)據(jù)？
答：可以。每天計(jì)數(shù)的目的是預(yù)防菌落彌漫互相覆蓋，干擾最終的點(diǎn)計(jì)。你可以用油性筆將每天點(diǎn)計(jì)的數(shù)記錄在培養(yǎng)皿上，發(fā)報(bào)告時(shí)只要最終菌落數(shù)就行了。
11、若樣品中有不溶物（如片劑中的輔料顆粒），經(jīng)常會(huì)影響培養(yǎng)前期的結(jié)果，藥典要求逐日計(jì)數(shù)，所以報(bào)告中會(huì)出現(xiàn)第二、三日菌落數(shù)小于第一日的現(xiàn)象，請(qǐng)問該如何向客戶或監(jiān)檢機(jī)構(gòu)解釋這種結(jié)果？或者是否可以不計(jì)第一、二日菌落數(shù)，待輔料顆粒與菌落可以區(qū)分后再計(jì)數(shù)？
答：報(bào)告書不需要顯示第一、第二天的結(jié)果，只需報(bào)告最終結(jié)果。理由請(qǐng)見第9題答復(fù)?；蛘呤窃跔I養(yǎng)瓊脂中加入TTC試劑（每100ml加入0.1%）
12、由于微生物檢驗(yàn)的特殊性，對(duì)于樣品的微生物限度檢查計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)是否可登記在表格內(nèi)（此表格僅含樣品名稱、批號(hào)及檢查結(jié)果）。之后再將檢測(cè)結(jié)果移至詳細(xì)記錄中？
答：原始記錄應(yīng)該只有1份。如果你說的詳細(xì)記錄是屬于一般記錄，是沒有必要的，如果是指報(bào)告書，就應(yīng)該沒問題。這要看你自己訂的SOP。
13、直接接種法培養(yǎng)后的菌落報(bào)告：原液230cfu,稀釋10倍后 40cfu,請(qǐng)問按2010版藥典的菌落數(shù)報(bào)告規(guī)則如何報(bào)告菌落數(shù)？
答：報(bào)告菌落數(shù)為40×10=400cfu。應(yīng)以菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)后的最大值作為報(bào)告結(jié)果。
14、05版藥典供試品離心5分鐘，而10版藥典改用離心3分鐘，原來按5分鐘驗(yàn)證的產(chǎn)品是否需要重新驗(yàn)證？
答：是的。需要再確認(rèn)一下。
15、10版藥典附錄微生物限度檢查法中結(jié)果判斷的菌落計(jì)數(shù)單位是以“cfu”表示，但正文品種項(xiàng)下是以“個(gè)”表示，最終應(yīng)以哪位為準(zhǔn)呢？
答：應(yīng)該是以cfu為單位。正文是由于印刷時(shí)沒統(tǒng)一修改過來，關(guān)于這個(gè)問題，在增補(bǔ)本上修訂過來。（在增補(bǔ)本沒出來之前，正文品種還是以個(gè)為單位）
16、為何控制菌液的濃度為50-100cfu/ml。
答：50-100cfu在平板上比較好點(diǎn)計(jì)，菌落不容易重疊。少于50，則實(shí)驗(yàn)誤差會(huì)增大，重現(xiàn)性不好，大于100則容易造成菌落太密或重疊不好計(jì)數(shù)。
17、藥典上控制菌檢查的方法驗(yàn)證，只是說把菌加至增菌培養(yǎng)基中檢出即可，那我們實(shí)際做驗(yàn)證與記錄時(shí)，是否要做增菌以后的步驟呢？
答：要。不然你怎么知道檢出來的菌是你加進(jìn)去的試驗(yàn)菌呢？
18、采用薄膜過濾法檢驗(yàn)，陽性菌，計(jì)數(shù)是否也用此方法計(jì)數(shù)？
答：是的。
19、對(duì)于10版藥典延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，控制菌35-37℃改為30-35℃培養(yǎng)溫度，一些已經(jīng)驗(yàn)證（按05版藥典）檢品是否需要重新驗(yàn)證？是否有必要進(jìn)行延長(zhǎng)時(shí)間前后菌生長(zhǎng)情況變化的驗(yàn)證試驗(yàn)？
答：目前沒有相關(guān)性規(guī)定，我們認(rèn)為可按原來已經(jīng)驗(yàn)證的方法，用2010年版的培養(yǎng)時(shí)間和溫度再確認(rèn)一下，如果結(jié)果符合藥典要求，則可用。如果不可行，則調(diào)整后再進(jìn)行驗(yàn)證。
20、若無需都重新驗(yàn)證，那么參照標(biāo)準(zhǔn)為05版藥典，又可以通過什么文件來更改為參照10版藥典？
答：請(qǐng)看上一題。
21、檢驗(yàn)控制菌用培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力的檢查，也需要對(duì)照培養(yǎng)基嗎？例如：大腸埃希菌用的BL增菌液。
答：是的。請(qǐng)看附錄“微生物限度檢查法”中的表2。
22、10版藥典增加貼膏劑的檢查，狗皮貼膏藥屬于貼膏劑嗎？
答：應(yīng)該是的。請(qǐng)對(duì)照《中國藥典》一部附錄P8進(jìn)行確定。
23、請(qǐng)問若試驗(yàn)條件限制未能使用勻漿儀制備非規(guī)定滅菌制劑是否可采用溫?zé)幔ú怀^45℃）的稀釋液？
答：如果能夠充分分散樣品，可以的。
24、請(qǐng)問若采用薄膜過濾法進(jìn)行驗(yàn)證，由于過濾難度大，是否可以每膜過濾相當(dāng)于供試品0.1g，報(bào)告以結(jié)果乘以10？
答：驗(yàn)證計(jì)數(shù)時(shí)可以的，驗(yàn)證控制菌時(shí)檢驗(yàn)總量應(yīng)達(dá)到藥典要求，如果一張膜檢驗(yàn)量達(dá)不到，可分幾個(gè)膜。
25、請(qǐng)問采用靜置分層取上清液薄膜過濾，是否需要加稀釋劑對(duì)照組？
答：個(gè)人觀點(diǎn)可以不用,但未經(jīng)驗(yàn)證。
26、供試品靜置分層取上清液進(jìn)行試驗(yàn)，靜置3~5分鐘，是否經(jīng)過驗(yàn)證供試品的本底菌不會(huì)沉到底部？
答：未經(jīng)驗(yàn)證。
27、培養(yǎng)基適用性檢查，抑制能力檢查用菌種是哪些？
答：控制菌的培養(yǎng)基適用性檢查,請(qǐng)看藥典“微生物限度檢查法”中表2，計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基請(qǐng)看“計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查”。
28、投料中有神曲提取物，限度應(yīng)界定為多少？
答：不是藥材原粉投料，標(biāo)準(zhǔn)均按“不含藥材原粉的制劑”執(zhí)行。
29、微生物限度檢查里有關(guān)經(jīng)驗(yàn)類的東西都必須經(jīng)過驗(yàn)證才可以使用,那么驗(yàn)證的內(nèi)容包括哪些數(shù)據(jù)應(yīng)記錄，是否也應(yīng)該有文件與記錄？
答：參照藥典，你是作什么樣的檢驗(yàn)，就作什么樣的驗(yàn)證，有驗(yàn)證就應(yīng)該有記錄。
30、比如10倍稀釋級(jí)菌落數(shù)為0，100倍稀釋級(jí)菌落數(shù)為2，按2005年版藥典應(yīng)以低稀釋級(jí)菌落數(shù)報(bào)告為＜10，還是按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告為200個(gè)/g，是否理解正確？
答：按《中國藥典》2005年版報(bào)告應(yīng)為＜10個(gè)/g（或ml），按《中國藥典》2010年版報(bào)告應(yīng)為200cfu/g（或ml）。
31、計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：執(zhí)行新版藥典是否就延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間做方法驗(yàn)證？
答：是。
32、平皿法中提到“每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少檢驗(yàn)2ml供試液”，是每皿注2ml還是每皿注1ml？如要做0.5ml或0.2ml，本級(jí)是否還需做1ml?答：常規(guī)平皿法時(shí)每皿注1ml，做2個(gè)皿；培養(yǎng)基稀釋法（即每皿0.5ml或0.2ml）時(shí)，供試液總量也應(yīng)是2ml，每1ml菌落數(shù)合計(jì)后，2ml的菌落數(shù)再平均；本級(jí)就不需做1ml了，但下一級(jí)就只做1ml/皿就行了。
33、在細(xì)菌霉菌計(jì)數(shù)檢查中，老師提到的每個(gè)稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少檢驗(yàn)2ml供試液，但2010版藥典上并沒有要求要這樣做，那應(yīng)以哪個(gè)做法為準(zhǔn)？
答：藥典中對(duì)平皿法的描述：平皿法“取供試液1ml，置直徑90mm 的無菌平皿中，注入15～20ml 溫度不超過45℃的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2 個(gè)平板?！边@里的描述是以常規(guī)平皿法進(jìn)行描述的，所以“每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2 個(gè)平板”，也就是2ml的量。對(duì)于培養(yǎng)基稀釋法，請(qǐng)看藥典供試液的制備中3. (6) ①。
34、10版藥典要求檢查沙門菌的供試品，其檢驗(yàn)量應(yīng)增加20g或20ml，（其中10g或10ml用于陽性對(duì)照試驗(yàn)）是否指20g或20ml樣品中10g或10ml直接用于沙門菌控制檢查，另10g或10ml加pH7.0的緩沖液100ml作為1：10的供試品溶液作為細(xì)菌，霉菌，酵母菌的檢驗(yàn)嗎？還是指20g都用于沙門菌檢查？
答：20g都是用于沙門菌檢查。沙門菌的檢查法是：取3份200ml營養(yǎng)肉湯，其中2份分別加入10g或10ml樣品，取其中1份加入10~100cfu菌液作陽性對(duì)照。第3份加入10ml稀釋劑作陰性對(duì)照進(jìn)行檢查，所以。細(xì)菌，霉菌，酵母菌檢驗(yàn)的樣品不包括在這里。
35、沙門菌檢查為10g或10ml，為何一次檢查量又為20g或20ml？（P130）答：其中10g（或10ml）是檢驗(yàn)用的，另10g（或10ml）是用于陽性對(duì)照試驗(yàn)的。請(qǐng)看上一題目解釋。
36、采用薄膜過濾法時(shí)，濾膜采用何種方法滅菌最好？
答：據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)，最好采用一次性過濾器。如果用多次使用的過濾器，則濾膜用濕熱滅菌比較好，因?yàn)楦蔁釡缇?，濾膜較脆，試驗(yàn)時(shí)不容易保證濾膜完整。
37、方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，采用平皿法稀釋級(jí)計(jì)數(shù)，是否要做稀釋級(jí)對(duì)照組？
答：稀釋級(jí)對(duì)照組？是指本底菌組嗎？如果是，那就要。因?yàn)橐叫性囼?yàn)，才能知道同一稀釋級(jí)的本底菌是多少。如果是指稀釋劑對(duì)照組，就不用，因?yàn)樗玫南♂寗┦撬幍湟?guī)定的，是無毒性的稀釋劑。
38、方法驗(yàn)證的培養(yǎng)基稀釋法驗(yàn)證（樣品0.2ml）只做2個(gè)平皿，每個(gè)平皿的加菌量是多少？如果同步加0.2ml菌，其加菌量就達(dá)不到50~100cfu。
答：不管每皿加的供試液的量是多少，每皿加菌液的量都是1ml ,即都是50~100cfu。
39、平皿法（稀釋法）計(jì)數(shù)驗(yàn)證時(shí)，取最低稀釋供試液如0.5ml和50~100cfu試驗(yàn)菌，那50~100cfu的試驗(yàn)菌是指50~100cfu還是50~100cfu∕0.5ml？我們是要加1ml還是0.5ml的試驗(yàn)菌？
答：平皿法（稀釋法）計(jì)數(shù)驗(yàn)證時(shí)，每皿要加的菌液是50~100cfu，一般我們配制的菌液濃度是50~100cfu/ml，所以就加1ml。如果你配制的菌液不是這個(gè)濃度，你可以折算，只要加的菌數(shù)是50~100cfu/皿就行了。
40、細(xì)菌霉菌方法驗(yàn)證，同時(shí)做1ml，0.5ml，0.2ml供試品組及供試品驗(yàn)證組時(shí)，菌液是否也按1ml，0.5ml，0.2ml分別加入？此時(shí)1ml，0.5ml，0.2ml供試品驗(yàn)證組中的菌數(shù)能否也達(dá)到50~100cfu？
答：驗(yàn)證時(shí)，不論是1ml，0.5ml，0.2ml的供試液，每皿的加菌量都是50~100cfu，即1ml（如果你配制的菌液濃度是50~100cfu/ml）。
41、培養(yǎng)基稀釋方法驗(yàn)證，每皿0.2ml，加菌液0.2ml，那么0.2ml的菌液計(jì)數(shù)是否在50~100cfu∕0.2ml。
答：請(qǐng)看上一題的解釋。
42、微生物限度檢查霉菌、酵母菌要求不超過100的情況下，這兩種菌是不是要分開來檢，用不同培養(yǎng)基檢測(cè)？目前只用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)這兩種菌，有沒有必要修改？
答：按藥典規(guī)定，一般品種是用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)這兩種菌；含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定霉菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定酵母菌數(shù)，合并計(jì)數(shù)。
43、測(cè)表面微生物時(shí)，直接接觸藥品與間接接觸藥品的限度（≤25）一致，是否有不妥，如果有不同意見，可否提供其計(jì)數(shù)方法？另外，如果檢測(cè)到菌落數(shù)超過100以上，那么報(bào)告規(guī)則的菌數(shù)也是取兩位有效數(shù)字嗎？
答：“測(cè)表面微生物”？這應(yīng)該是藥包材的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)吧？由于我們尚未開展這項(xiàng)業(yè)務(wù)，所以對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)情況不了解，但既然已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)，就肯定有其合理性，如有不同意見，可向標(biāo)準(zhǔn)制訂部門反映，并提出你認(rèn)為合理的解決辦法。微生物的報(bào)告規(guī)則一般都是取兩位有效數(shù)字。
44、內(nèi)包裝材料PVC硬片，鋁箔等樣品的微生物檢驗(yàn)（限度）方法？
答：是藥包材的檢驗(yàn)？應(yīng)該有相應(yīng)的檢驗(yàn)方法吧！
45、控制菌檢查，大腸埃希菌IMViC試驗(yàn)，結(jié)果顯示未檢出，有沒有硬性規(guī)定必須要進(jìn)一步鑒定？
答：對(duì)于大腸埃希菌檢查，IMViC試驗(yàn)已經(jīng)是鑒定試驗(yàn)了，如果IMViC試驗(yàn)結(jié)果顯示未檢出，那么就可以報(bào)告未檢出大腸埃希菌。
46、菌數(shù)報(bào)告按兩位有效數(shù)字報(bào)告，是按數(shù)字修約方法進(jìn)行數(shù)據(jù)修約，還是只用保留兩位有效數(shù)字，如菌數(shù)為364報(bào)告菌數(shù)為360，還是370；若菌數(shù)為3670報(bào)告菌數(shù)應(yīng)為多少？
答：修約原則是4舍6入5留雙。即菌數(shù)為364報(bào)告菌數(shù)為360；若菌數(shù)為3670報(bào)告菌數(shù)應(yīng)為3700；如果是3650，則報(bào)告菌數(shù)應(yīng)為3600。
47、在日常檢驗(yàn)中控制菌檢驗(yàn)方法通過驗(yàn)證的控制菌檢驗(yàn)可否不做陽性對(duì)照？理解：在驗(yàn)證時(shí)已做過控制菌供試液，驗(yàn)證時(shí)供試液對(duì)控制菌無抑菌性，若只是做控制菌（不加供試液）則在培養(yǎng)基適用性時(shí)已證明培養(yǎng)基的質(zhì)量，那么每次試驗(yàn)做陽性對(duì)照的意義是什么？或者陽性對(duì)照試驗(yàn)怎么做？
答：從理論上來說是可以的，驗(yàn)證試驗(yàn)實(shí)際上就是檢驗(yàn)時(shí)的陽性對(duì)照試驗(yàn)。但藥典要求控制菌檢查時(shí)必需同時(shí)從陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，這應(yīng)該是考慮到檢驗(yàn)過程的檢驗(yàn)系統(tǒng)的誤差吧。本人認(rèn)為，生產(chǎn)廠家對(duì)自己的產(chǎn)品在經(jīng)驗(yàn)證后，檢驗(yàn)時(shí)如果每天同一產(chǎn)品批量很大，可以只做一個(gè)陽性對(duì)照，但對(duì)于藥檢所則必須每批都做，因?yàn)閷?duì)于同一品種，不同廠家其生產(chǎn)工藝不盡相同，在檢驗(yàn)過程中對(duì)被檢微生物的干擾也不同。因此，藥檢所應(yīng)每批都做。
48、取樣量藥典要求“從2個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品”，是否包括2個(gè)？
答：包括。
49、請(qǐng)問藥廠自行做的微生物方法驗(yàn)證是否需要經(jīng)過藥檢所的審核？若產(chǎn)品更改為輔料，重新做方法驗(yàn)證，是否需要到藥檢所備案或需要藥檢所審核？
答：藥廠自行做的微生物方法驗(yàn)證不需要經(jīng)過藥檢所的審核。同樣，重新驗(yàn)證后也不需要。但如果你的檢品需要報(bào)注冊(cè)檢驗(yàn)，則你必需提供你的整個(gè)驗(yàn)證資料，藥檢所將根據(jù)情況對(duì)你的方法進(jìn)行確認(rèn)，看方法是否可行。
50、是否每次做培養(yǎng)基適用性都必須與對(duì)照培養(yǎng)基進(jìn)行比較？如果第一批培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基比較回收率為90%，那么第二批培養(yǎng)基與第一批培養(yǎng)基比較回收率為80%，則折算為第二批培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基比較回收率為72%，之后購買的培養(yǎng)基與前一批比較，而不用每次培養(yǎng)基適用性都與對(duì)照培養(yǎng)基比較，這樣可不可行？
答：請(qǐng)按藥典要求做，至于內(nèi)部控制則要自己掌握。但你要保證第一批培養(yǎng)基在你用于與第二、第三批比較時(shí)，質(zhì)量保持其與對(duì)照培養(yǎng)基比較時(shí)一樣，因?yàn)殡S著時(shí)間的推移，培養(yǎng)基的質(zhì)量肯定有所下降。
51、微生物檢驗(yàn)驗(yàn)證時(shí)，如我用一瓶普通脫水培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基測(cè)定菌落數(shù)，如普通脫水培養(yǎng)基符合適用性檢查，那么該瓶普通脫水培養(yǎng)基能否作為以后工作中的對(duì)照培養(yǎng)基來用？
答：請(qǐng)看上一題的解釋。
52、培養(yǎng)時(shí)間有要求24~48h，也有要求24~72h的，像這種時(shí)間要求范圍比較大的情況，如果在最短的時(shí)間內(nèi)（如：24h）就已經(jīng)長(zhǎng)菌，但需進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)判斷該菌是否為控制菌，那么，是否需要培養(yǎng)到最長(zhǎng)時(shí)間（如：48h或72h）再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)？
答：長(zhǎng)勢(shì)好的話可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)不用等到最長(zhǎng)時(shí)間。
53、操作結(jié)果的RSD%的范圍比較寬裕，是否可信？（eg：黑曲霉若＞20cfu∕皿時(shí)，菌落將擴(kuò)散至難以分離，所以回收率精確度較低）
答：這個(gè)問題要具體問題具體分析。菌落漫延，這是要求逐日觀察的主要原因之一，應(yīng)在菌落能分辨的時(shí)候點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。加菌量太少，容易出現(xiàn)誤差大，重現(xiàn)性差，所以要求加的菌數(shù)在50~100cfu。
54、含藥材細(xì)粉的膠囊如何制備供試液？
答：按固體制劑供試液的制備方法制備，可用45℃水浴軟化溶解膠囊殼。
55、大腸菌群檢查，需陽性對(duì)照嗎？
答：要的。陽性對(duì)照菌為大腸埃希菌。
56、菌液涂布時(shí)，用接種棒還是涂布棒涂？
答：用L型涂布棒，也可用玻棒自制。
57、控制菌的培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力檢查，對(duì)照菌加于固體培養(yǎng)基如何涂布，用什么工具來涂布？
答：請(qǐng)看上一題。
58、三部藥典中有些產(chǎn)品細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)用每g多少cfu，但有些為每g多少個(gè)，應(yīng)怎樣記錄？
答：應(yīng)該是cfu才對(duì)的，這些應(yīng)該是在轉(zhuǎn)版時(shí)沒轉(zhuǎn)過來吧，在增補(bǔ)本應(yīng)該會(huì)轉(zhuǎn)過來。但是在沒轉(zhuǎn)過來之前，它還是法定的，必需按藥典上的寫法來執(zhí)行。
59、如樣品的控制菌為大腸埃希菌沒檢出，但檢出其它種菌，結(jié)果該怎樣判定？
答：如果是其他致病菌，請(qǐng)看微生物限度檢查法的結(jié)果判斷第一句。
60、我們是做糖衣片的，微生物限度檢查吸取供試液時(shí)，吸管有時(shí)會(huì)被粉末塞住，那能不能讓供試液沉淀后取其上清液呢？這樣操作結(jié)果可靠嗎？
答：請(qǐng)將藥片盡可能打碎，如果還不能解決問題，我們的經(jīng)驗(yàn)是：可讓大藥渣沉降后取上層液進(jìn)行試驗(yàn)，但沉降時(shí)間盡可能短(在3-5分鐘內(nèi))，這樣做對(duì)結(jié)果會(huì)有一定影響，但應(yīng)該在可接受范圍內(nèi)。
61、微生物限度檢查控制菌檢查時(shí)，如供試液的增菌后無菌生長(zhǎng)，可否直接發(fā)供試液的未檢出控制菌，此時(shí)，陽性對(duì)照試驗(yàn)還需繼續(xù)做下去嗎？
答：只要能判定供試液增菌后無菌生長(zhǎng)，陽性對(duì)照試驗(yàn)菌長(zhǎng)出，就可發(fā)未檢出控制菌。
62、如何理解“菌落蔓延成片不以計(jì)數(shù)”？如10-1級(jí)有1個(gè)皿的菌落成片是否用10-2級(jí)來計(jì)數(shù)？
答：是的。
63、如何避免菌落成片？
答：1、培養(yǎng)基傾注時(shí)溫度不宜過高，可減少傾注后培養(yǎng)皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延，或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽；2、細(xì)菌計(jì)數(shù)時(shí)，在每100ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中加入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml，可使生成的菌落變紅色，容易點(diǎn)計(jì)，也可在一定程度上抑制菌落漫延。
64、請(qǐng)問一下對(duì)于生長(zhǎng)速度快、易蔓延的菌有什么好的方法控制，該如何計(jì)數(shù)，如采用陶瓦蓋培養(yǎng)時(shí)間要不要延長(zhǎng)？
答：請(qǐng)看上一題的說明。如用陶瓦蓋，培養(yǎng)時(shí)間不需要延長(zhǎng)。
65、請(qǐng)問若細(xì)菌、酵母菌平均菌落數(shù)不在其宜選取的范圍內(nèi)，即大于300及100cfu時(shí)，該如何報(bào)告菌數(shù)？另05版藥典的規(guī)定范圍是30~300/30~100，倘若當(dāng)菌落數(shù)大于300及100，如何報(bào)告？
答：應(yīng)該重新試驗(yàn)，將稀釋級(jí)再往高級(jí)進(jìn)一步稀釋，直到能有可報(bào)告的稀釋級(jí)?？稍诠ぷ髦幸詫?duì)產(chǎn)品的認(rèn)識(shí)將稀釋級(jí)調(diào)整到可報(bào)告的級(jí)別進(jìn)行檢驗(yàn)。
66、請(qǐng)問對(duì)于抑菌性難以消除的粉末狀樣品，采用最好的消除抑菌性的方法是什么？
答：如果能溶于水，目前來說，最好的除菌方法是薄膜過濾法；其次是找到相應(yīng)的中和劑。
67、我們生產(chǎn)的產(chǎn)品為外用搽劑非無菌產(chǎn)品，需要對(duì)所有原輔料做微生物限度檢查嗎？
答：生產(chǎn)企業(yè)對(duì)原輔料的微生物限度檢查，應(yīng)根據(jù)自己的情況進(jìn)行控制。參見一部附錄P88（或二部附錄P116），微生物限度標(biāo)準(zhǔn)第7點(diǎn)。（個(gè)人意見：如果所用的原輔料直接投料，就要控制，如果還要進(jìn)一步提取等，則可通過控制中間產(chǎn)品的微生物限度來控制。）
68、原輔料是否要單獨(dú)做方法驗(yàn)證？
答：所有要檢查微生物限度的品種（當(dāng)然包括原輔料），都要做方法驗(yàn)證。
69、中藥材的微生物限度如何檢測(cè)？如超標(biāo)應(yīng)如何控制？
答：1.中藥材的微生物限度檢查，參照固體制劑的供試液制備，并根據(jù)給藥途徑執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，如用于直接投料至口服制劑的，還應(yīng)檢大腸菌群。2.如超標(biāo)，具體問題具體分析。
70、中間產(chǎn)品可否不做微生物檢測(cè)？
答：中間產(chǎn)品應(yīng)該控制微生物限度，各企業(yè)應(yīng)內(nèi)部質(zhì)控相關(guān)的具體要求。
71、廠家用10-2稀釋級(jí)作驗(yàn)證，那我們藥檢所作檢查時(shí)是否從10-2稀釋級(jí)開始做？
答：是的。
72、省所做微生物限度時(shí)，廠家沒有做驗(yàn)證，那省所是自己做驗(yàn)證，還是退回去？又或者廠家的控制菌驗(yàn)證沒有做全（例如漏了沙門菌沒做），那省所怎么處理？
答：1、如果是注冊(cè)檢驗(yàn)，廠家沒有做驗(yàn)證，我們是不會(huì)接收樣品的，也就是說，沒做驗(yàn)證或驗(yàn)證不全，肯定退回去。 2、如果是委托檢驗(yàn)，由于是協(xié)議性質(zhì)，我們就按協(xié)議進(jìn)行檢驗(yàn)。
73、微生物限度檢查時(shí)，只有細(xì)菌數(shù)不合格，那么復(fù)試是否可以只做細(xì)菌數(shù)檢查就行了？
答：可以。
74、樣品制備中，如羧甲淀粉鈉等崩解劑遇水膨脹，經(jīng)試驗(yàn)1g∕100ml仍為膠體漿糊狀，無法過濾且難與培養(yǎng)基融合，再加大稀釋倍數(shù)，則代表量太少，請(qǐng)問這種輔料采用何種方法進(jìn)行微生物限度檢查？
答：羧甲淀粉鈉應(yīng)該沒有抑菌作用，無法過濾可用平皿法進(jìn)行檢查，且供試液制備時(shí)，稀釋劑的溫度適當(dāng)調(diào)低些。
75、若樣品對(duì)微生物生長(zhǎng)有促進(jìn)性，采用薄膜過濾法應(yīng)如何消除此影響，或者有什么其他方法可以消除促進(jìn)性以獲得更準(zhǔn)確結(jié)果？
答：采用薄膜過濾法就是很好的消除影響的方法；藥典上規(guī)定“供試液從制備到加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基不得超過1個(gè)小時(shí)”，就是考慮到樣品對(duì)微生物存在促進(jìn)或者抑制作用的影響。因此要獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果，就必需盡量縮短從供試液的制備到加入培養(yǎng)基的時(shí)間。另外，也可根據(jù)樣品的特性有針對(duì)性的加入中和劑等。
76、控制菌檢查對(duì)于大腸的檢查，MUG試驗(yàn)中顯陽性或難以判斷時(shí)，“將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到EMB”，這里的培養(yǎng)液是指MUG還是之前擴(kuò)增的BL？
答：藥典上并沒有“將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到EMB”這一描述。但對(duì)于MUG和靛基質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí)，是這么規(guī)定的：“如MUG 陽性、靛基質(zhì)陰性，或MUG 陰性、靛基質(zhì)陽性，則應(yīng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18～24 小時(shí)?！?br>
77、膽香鼻炎含有豬膽汁膏，毛雞藥酒含有毛雞浸出夜，霍膽丸含豬膽粉，這三個(gè)產(chǎn)品需要檢沙門菌嗎？
答：是的。（因含豬膽汁膏、毛雞、豬膽粉）。
78、微生物檢驗(yàn)時(shí)，勻漿機(jī)應(yīng)把轉(zhuǎn)速調(diào)到多少才不會(huì)對(duì)微生物有損傷？
答：沒有相關(guān)的規(guī)定，目前一般使用轉(zhuǎn)速為3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘。
79、如果使用藥典以外的培養(yǎng)基進(jìn)行微生物限度檢查（比如TSA），怎么進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查，是否有合適的對(duì)照培養(yǎng)基？
答：可以參照“藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”對(duì)所用培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行控制。至于是否有相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基，要看中檢所是否來得及研制。
80、微生物限度檢查的方法驗(yàn)證，至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立平行試驗(yàn)，每個(gè)獨(dú)立平行試驗(yàn)可否使用不同批號(hào)的樣品？
答：可以，且最好是用3個(gè)不同批號(hào)樣品進(jìn)行驗(yàn)證。
81、每個(gè)獨(dú)立的平行試驗(yàn)是否有必要用3個(gè)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行驗(yàn)證？
答：用3個(gè)不同批號(hào)的樣品進(jìn)行驗(yàn)證，可以增加驗(yàn)證結(jié)果的重現(xiàn)性。
82、微生物限度檢查中，培養(yǎng)基的適用性檢查時(shí)對(duì)每個(gè)批號(hào)的培養(yǎng)基進(jìn)行還是對(duì)每次制備好的培養(yǎng)基進(jìn)行？
答：請(qǐng)看《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則》中，關(guān)于培養(yǎng)基第3點(diǎn)，質(zhì)量控制試驗(yàn)的描述：“除藥典附錄另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行一次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗(yàn)，試驗(yàn)的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。”
83、能否舉例說明哪些培養(yǎng)基是指示能力檢查培養(yǎng)基？
答：請(qǐng)看“微生物限度檢查法”中表2。
84、05版SOP中有說經(jīng)驗(yàn)證后控制菌可以不用做陽性對(duì)照，10版是否有相同的說法？已建立控制菌方法是否還需作陽性對(duì)照？
答：藥典規(guī)定，控制菌檢查必需同時(shí)檢查陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。05版SOP《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作》中并沒有說經(jīng)驗(yàn)證后控制菌可以不用做陽性對(duì)照，不知你所說的是那個(gè)SOP？
85、請(qǐng)問化藥軟膠囊還需要檢沙門菌嗎？
答：如果是口服制劑、有動(dòng)物藥投料就必需檢查。
86、微生物方法驗(yàn)證過程中，供試液的制備，檢細(xì)菌與霉菌及酵母菌處理不一樣，這樣方法是否能成立？
答：完全有可能。檢查方法是經(jīng)驗(yàn)證的，對(duì)于有抑菌作用的品種，經(jīng)驗(yàn)證后細(xì)菌計(jì)數(shù)方法與霉菌及酵母菌的檢查方法不一樣，這很正常，只要方法是經(jīng)驗(yàn)證，符合藥典要求就可以。
87、2010版藥典控制菌培養(yǎng)溫度降低到30~35℃，那么以2005版藥典驗(yàn)證過程控制菌檢驗(yàn)方法，2010版藥典還需要再驗(yàn)證嗎？
答：是的。
88、檢大腸埃希菌時(shí)，MUG觀察一定要5小時(shí)觀察，是否可以只在24h觀察？
答：可以。
89、培養(yǎng)基適用性檢查涂布時(shí)如何考慮（或消除）涂布棒上沾到菌落的影響？
答：涂布時(shí)，試驗(yàn)用培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基都同樣操作，所以這個(gè)影響是同等的，可不需考慮。
90、純化水要多少ml過濾，是不是原液要不要沖洗液沖洗？要不要陰性對(duì)照？
答：過濾多少ml可根據(jù)樣品微生物污染的程度來決定，只要最終每膜上的菌落不超過點(diǎn)計(jì)要求（即100cfu）就行了，結(jié)果報(bào)告時(shí)將菌落數(shù)除以ml數(shù)即可?？梢圆挥脹_洗。必需做陰性對(duì)照。
91、用稀釋法檢驗(yàn)控制菌的時(shí)候，金黃色葡萄球菌是10ml（相當(dāng)1g，1ml）至500ml肉湯，能否用2ml至100肉湯？
答：可以，但應(yīng)該同時(shí)做5份，使檢驗(yàn)用的樣品總量達(dá)到1g（或1ml）。
92、保留2倍有效數(shù)字（細(xì)菌，霉菌報(bào)告數(shù)）如果檢出細(xì)菌是1160cfu/g，是否報(bào)告數(shù)必須寫成1.1*103cfu/g，還是直接寫1/100（不過這樣好像不是2倍有效數(shù)字）。
答：報(bào)告數(shù)應(yīng)該寫成1.2Χ103cfu/g或1200cfu/g。
93、怎么證明微生物限度中加入的表面活性劑，中和劑或滅活劑的生長(zhǎng)和存活無毒性？是在驗(yàn)證中做稀釋劑對(duì)照組就可證明是否其無毒性了嗎？還是？
答：是的，在驗(yàn)證中做稀釋劑對(duì)照組就可證明是否其無毒性。
94、平皿稀釋法時(shí)，若每一個(gè)平皿加入0.5ml供試液，那么，陰性也是加0.5ml嗎？還是陰性加1ml？
答：陰性是檢驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)是否受微生物污染的試驗(yàn)，應(yīng)該是取1ml稀釋液。
95、輔料中的香精（如楊梅香精），滑石粉是否按非水溶性制劑供試品處理？氫氧化鈉又如何處理呢？
答：香精和滑石粉，如果能分散于水中，或者加表面活性劑后能分散于水中就可以，不一定非要按非水溶性制劑制備供試液。氫氧化鈉可溶于水，可按普通檢品檢驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證處理。
96、有兩種制劑形式的原料藥該如何制定衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)呢？如一種原料藥可用于口服制劑以及外用制劑？
答：可以按要投料的劑型進(jìn)行控制，或者直接按要求嚴(yán)格的一種來要求。
010版中國藥典培訓(xùn)回答（第3部分：無菌檢查）
廣東省藥檢所對(duì)《中國藥典》2010版微生物專題培訓(xùn)班的有關(guān)問題解答答案。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120415/3980531/
1、 供試品傳入無菌，對(duì)表面進(jìn)行消毒。用75%無菌酒精浸泡表面是否可行？可用如何方法。（等紫外照射1h 酒精噴射，是否可行？注：無緩沖間的情況。從一般區(qū)直接進(jìn)入傳遞窗）
答：用75%無菌酒精浸泡表面應(yīng)該可行，但酒精易燃。 可用普通消毒劑如新潔爾滅等消毒。
2、無菌實(shí)驗(yàn)供試品在傳入無菌傳遞窗前能否泡消毒液？
答：視包裝而定。如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不可以。
3、檢驗(yàn)針劑時(shí)，安瓿表面消毒可否用碘液浸泡作為消毒，如果可以，它會(huì)殺死樣品本身的微生物嗎？
答：我們沒有碘液浸泡消毒的經(jīng)驗(yàn)。 就浸泡方式而言，視包裝而定，如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不可以。
4、微生物檢查樣品傳遞消毒處理，需作驗(yàn)證嗎?如何確定其消毒效果？
答：驗(yàn)證當(dāng)然最好，但也應(yīng)結(jié)合常識(shí)、經(jīng)驗(yàn)等，盡量減低工作量。
5、藥典要求只要供試品的特性允許優(yōu)先考慮薄膜過濾法。對(duì)于小劑量無抑菌作用的注射劑，是直接接種法好還是薄膜過濾法好？
答：優(yōu)先考慮薄膜過濾法，可視樣品包裝情況而定。
6、無菌檢查驗(yàn)證，2010年版方法改變，變換了大腸埃希桿菌，請(qǐng)問從前經(jīng)過驗(yàn)證的無菌檢查方法，實(shí)施2010年藥典時(shí)是否必須從新的驗(yàn)證方法進(jìn)行驗(yàn)證？驗(yàn)證后從能進(jìn)行無菌檢查？
答：應(yīng)重新驗(yàn)證。
8、無菌制劑的處方與工藝都沒有改變，10版藥典出版是否還需重新驗(yàn)證？
答：10版用大腸埃希替代銅綠假單胞，應(yīng)重新驗(yàn)證。
9、05版我們已經(jīng)做了方法驗(yàn)證，10版還要再做方法驗(yàn)證嗎？
答：如前所述。
10、做陽性對(duì)照，為什么同是做5批檢樣，到最后只是兩到三批長(zhǎng)菌？原因出在哪？濾膜嗎？（我們是做抗菌素的產(chǎn)品）
答：原因是多方面的。請(qǐng)考慮方法的耐用性；此外，操作前后是否一致（比如：供試品溶液溶解是否徹底、供試品溶液的濃度是否一致、對(duì)濾膜濾筒的濕潤、每次過濾對(duì)濾筒的蕩洗、抽干、抽干是否過久等等）等等都有可能是影響因素。
11、清潔無菌室所用消毒液如何做到無菌拖把、拖桶如何做到無菌？
答：消毒液可采用過濾的方法。無菌拖把、拖桶可采用浸泡、高溫滅菌的方法。
12、微生物的操作記錄，可否直接用電子版進(jìn)行記錄。也就是將操作結(jié)果及過程記錄在電子系統(tǒng)內(nèi)？如細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)，在操作規(guī)程上可否寫成為72±2小時(shí)。生產(chǎn)企業(yè)可否將有菌種的檢查項(xiàng)目，如方法學(xué)驗(yàn)證、培養(yǎng)基適用性檢查委托有資格的單位檢驗(yàn)？
答：可直接用電子版進(jìn)行記錄。 細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)，建議在操作規(guī)程上寫成為72小時(shí)。 生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)該可將有菌種的檢查項(xiàng)目，如方法學(xué)驗(yàn)證、培養(yǎng)基適用性檢查委托有資質(zhì)的單位檢驗(yàn)。
13、高壓消毒爐的培訓(xùn)一般在哪里有舉行？
答：廣州：特種設(shè)備培訓(xùn)機(jī)構(gòu)鍋爐所
14、化妝品微控的容器洗滌一般用什么洗滌較好？
答：表面活性劑
15、貴所日常所用的消毒液是哪些？
答：新潔爾滅、消毒粉、75%酒精、來蘇兒。
16、消毒液本來就是用來消毒殺菌的，又怎么會(huì)存在消毒液是否無菌這一說法？
答：消毒液不是萬能的，對(duì)絕大對(duì)數(shù)菌有效，不排除對(duì)有些微生物無效。 有些消毒劑質(zhì)量難保證，如果有效成分濃度過低甚至無，則達(dá)不到滅菌效果。
17、能否直接用電磁爐煮培養(yǎng)基（加熱）？最佳加熱方法是？
答：電磁爐不能加熱玻璃瓶。我們所：水浴（100℃），微波爐。 18、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)后會(huì)有點(diǎn)渾濁（排除是菌生長(zhǎng)），是否可以在滅菌之前過濾培養(yǎng)基?
答：找出培養(yǎng)基混濁的原因，若是培養(yǎng)基與樣品發(fā)生作用導(dǎo)致的混濁，滅菌之前過濾培養(yǎng)基也是沒用的。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基含瓊脂，如果用濾膜，一般很難過濾；如果用紗布、棉花、濾紙等，則須考慮濾材對(duì)不同成分的吸附程度不同，可能造成培養(yǎng)基成分比例的改變。
19、方法驗(yàn)證時(shí)：對(duì)照加的菌液是最后才加嗎？
答：按藥典，在最后一次沖洗液中加入。
20、培養(yǎng)基適用性檢查無菌性檢查中“每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶））中”中“每批”指脫水商品培養(yǎng)基的生產(chǎn)批次，還是指制備的批次？
答：指制備批次的培養(yǎng)基。
21、微生物檢驗(yàn)用的各種試劑除了化學(xué)純，能否使用分析純？
答：可以。
22、生物安全柜，凈化操作臺(tái)每年是否需要檢定？
答：是的，我所是每年檢定一次。并定期檢測(cè)潔凈度，頻次自己制訂。
23、無菌操作時(shí)，對(duì)顯微鏡硬件條件的需求是怎樣？
答：顯微鏡：至少1000X，也就說要有油鏡。
24、生產(chǎn)原料藥的公司，其微生物檢測(cè)方法采用限度檢查法，請(qǐng)問潔凈室的劃分中還需要建立“無菌檢查室”嗎？
答：只要滿足藥典規(guī)定的萬級(jí)背景下的局部百級(jí)即可。
25、陽性接種室，有沒有硬性要求在萬級(jí)區(qū)域局部百級(jí)區(qū)域？
答：無硬性要求。但應(yīng)使用生物安全柜，并按生物安全柜的要求設(shè)置外圍空間。
26、陽性操作間的空調(diào)系統(tǒng)是否應(yīng)與微生物限度檢查的空調(diào)系統(tǒng)完全分開，若未分開，是否可以采取直排的方式？（不利用陽性間的空調(diào)回風(fēng)）
答：應(yīng)分開。直排不等于分開。
27、微生物限度實(shí)驗(yàn)室和陽性對(duì)照室的潔凈系統(tǒng)要分別獨(dú)立，如用同一套的HVAC，但都是全排，是否能接受？
答：應(yīng)分開。直排不等于分開。
28、微生物與無菌潔凈系統(tǒng)也一定分別設(shè)置嗎？
答：有條件最好將微生物限度檢查與無菌檢查潔凈系統(tǒng)分開。
29、潔凈區(qū)監(jiān)控中，某些設(shè)備不宜采用沖淋法和接觸碟法取樣，而擦拭法中棉簽釋放率很低（普通棉簽釋放率只有20%左右）。請(qǐng)問如何設(shè)計(jì)采樣方法才能真實(shí)反映設(shè)備表面微生物情況？
答：有些國外生產(chǎn)微生物檢驗(yàn)儀器的大公司，有專用的小拭子，可能更有效。
30、用潔凈服材質(zhì)做成袋子來代替牛皮紙的包扎滅菌是否可行？
答：我們所目前采用此法。
31、環(huán)境監(jiān)測(cè)用平皿預(yù)培養(yǎng)溫度和時(shí)間?
答：30-35℃，時(shí)間不少于48h
32、靈敏度檢測(cè)如何確定接種菌數(shù)量？
答：菌液在接種至靈敏度檢測(cè)用培養(yǎng)基的同時(shí)用微生物限度檢查法的平皿法測(cè)定每1ml菌液的cfu。
33、如何驗(yàn)證消毒劑消毒效果？
答：目前沒有統(tǒng)一的方法，自行設(shè)計(jì)。
34、消毒劑消毒效果如何驗(yàn)證？如何設(shè)定SAL接受標(biāo)準(zhǔn)？
答：目前沒有統(tǒng)一的方法，自行設(shè)計(jì)。
35、驗(yàn)證試驗(yàn)中，若供試品需加入β-內(nèi)酰胺酶，那么陽性對(duì)照管是否應(yīng)該加入等量β-內(nèi)酰胺酶？
答：驗(yàn)證試驗(yàn)時(shí)，不加，因?yàn)閷?duì)照管是用于比較試驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況的。 檢驗(yàn)時(shí)的陽性對(duì)照則加。
36、全封閉式無菌驗(yàn)證中，用0.9%Nacl溶液溶解后，抽入集菌器中，樣品溶液是否要停留幾秒鐘？讓樣品與濾膜充分接觸或者停留后溶液造成抗生素殘角？如何停留幾秒鐘？應(yīng)在100ml試停留還是50ml時(shí)停留合適？
答：不應(yīng)停留，應(yīng)讓樣品盡快通過，避免抑菌成分被吸附。薄膜過濾法的目的是僅讓微生物截留在濾膜上。
37、每張濾膜每次沖洗量一般100ml，總沖洗量不得超過1000ml，若供試品容量較大，總供試品樣品量按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定超過1000ml，那這種情況應(yīng)如何看待呢？
答：中國藥典未規(guī)定供試品溶液的體積，設(shè)計(jì)檢驗(yàn)方法時(shí)，兼顧供試品溶液的濃度和體積，盡量采用較小的體積。
38、裝消毒劑的容器是否要求滅菌？例如用可滅菌的不銹鋼材質(zhì)，因?yàn)樗芰系娜萜鞑荒軠缇鷨栴}。
答：應(yīng)該滅菌
39、配制用水最長(zhǎng)可以放置多久？
答：視放置條件，經(jīng)驗(yàn)證，自己設(shè)定。
40、對(duì)滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證，多久進(jìn)行一次？
答：根據(jù)自己工作情況，自己制訂。
41、微生物限度檢查時(shí)所用吸管是否均需計(jì)量？
答：無規(guī)定。
42、無菌，微生物限度實(shí)驗(yàn)，樣品與陽性對(duì)照可以共用一個(gè)培養(yǎng)箱嗎？答：有2種意見：其一，條件許可，分開，以免污染；其二，共用一個(gè)培養(yǎng)箱，使其在相同條件下培養(yǎng)。 我們：分開。
43、在無菌檢查項(xiàng)下，供試品檢驗(yàn)時(shí)，陽性對(duì)照是否必須每批都需做？是否供試品無菌試驗(yàn)跟陽性對(duì)照必須同步操作？
答：ChP要，同步。
生產(chǎn)企業(yè)一次生產(chǎn)80mg/瓶的凍干粉36000瓶，企業(yè)取20瓶
做無菌檢驗(yàn)，是否應(yīng)另增加10瓶做陽性試驗(yàn)？（方法：薄膜過濾法，濾膜三分法，一份陽性，另兩份置兩種不同培養(yǎng)基中。
答：是，總共需30瓶。
培養(yǎng)基靈敏度試驗(yàn)所用的菌種有6種，為什么沒有大腸？
答：有專家解釋：因銅綠與大腸均為革蘭氏陰性桿菌，而銅綠在醫(yī)院及自然界中更廣泛存在，致病性更強(qiáng)。
如果產(chǎn)品經(jīng)無菌驗(yàn)證后，是以大腸為對(duì)照菌時(shí)，可行嗎？
答：如果驗(yàn)證6種菌均可行，建議按藥典陽性對(duì)照章節(jié)的要求，設(shè)定陽性對(duì)照菌。如果驗(yàn)證結(jié)果樣品是抗革蘭陰性菌的，則陽性菌應(yīng)用大腸埃希菌。
靈敏度試驗(yàn)可要加入大腸？
答：否。
薄膜過濾法中，菌懸液的加入，在最后一次的沖洗液中加入小
于100cfu的試驗(yàn)菌，過濾，這個(gè)說法用封閉式過濾器（）要如何做？如果做法是加入培養(yǎng)基后，再從管子里加1ml的100cfu的菌，可行嗎？
答：在最后一次沖洗液中，經(jīng)封閉式過濾器頂部的透氣孔加入1ml的少于100cfu的菌液，抽干，再加培養(yǎng)基。
48、"全封閉式無菌檢驗(yàn)中，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，我們驗(yàn)證的是50ml*3 100ml*3，總沖洗量不超1000ml,可行嗎？"
答：可行。
49、《中國藥典》無菌檢查方法驗(yàn)證中“菌種加在最后一次沖洗液中，過濾”，如果某供試品無菌檢查方法無需進(jìn)行沖洗，那么菌懸液應(yīng)該加在哪合適？
答：藥典無規(guī)定，可在過濾完樣品后直接加菌液，然后加入培養(yǎng)基。
50、"無菌驗(yàn)證后，試驗(yàn)菌數(shù)經(jīng)測(cè)定，若加入菌數(shù)大于100cfu,該情況如何處理？是否需要判斷其試驗(yàn)無效，重新驗(yàn)證"
答：重新驗(yàn)證。
51、南方天氣濕度大，易發(fā)霉，毛巾或者衣服上可能有黑色的霉點(diǎn)洗不干凈，請(qǐng)問有沒有好的方法去除霉點(diǎn)？
答：漂白、消毒。
52、粉針注射劑，同一個(gè)品種有不同規(guī)格的產(chǎn)品，在建立方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)是否每個(gè)規(guī)格都需要進(jìn)行驗(yàn)證？
答：理論上，以最大規(guī)格建立的方法應(yīng)適用于其他較小規(guī)格。 但這樣做可能會(huì)提高成本，因小規(guī)格的沖洗量、滅活劑等用量可能可以更少，難以一概而論。
53、無菌檢查方法中陰性對(duì)照，每瓶溶劑，稀釋液，沖洗液都需要收集，是不是每做一批試驗(yàn)，都需同時(shí)操作兩臺(tái)集菌儀？陰性對(duì)照能否每一批溶劑，稀釋液，沖洗液抽一、兩瓶做陰性對(duì)照？
答：不一定每做一批試驗(yàn)，都需同時(shí)操作兩臺(tái)集菌儀。 陰性對(duì)照不應(yīng)該僅僅每一批溶劑，稀釋液，沖洗液抽一、兩瓶做陰性對(duì)照，應(yīng)盡可能將所用到的每瓶都留少量做陰性。
54、"每一張膜總沖洗量不得超過1000ml,這個(gè)總沖洗量包括樣品溶液?jiǎn)幔?quot;
答：不包括。
55、無菌性檢查，培養(yǎng)基是直接拿去培養(yǎng)，還是按照說明書滅菌處理后再拿去培養(yǎng)？
答：成品培養(yǎng)基直接培養(yǎng)；脫水培養(yǎng)基或自己配制的培養(yǎng)基滅菌后拿去培養(yǎng)。
56、液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（中檢所）極易被氧化，藥檢所做實(shí)驗(yàn)時(shí)是將管裝量定在多高？
答：我們所用的是全封閉一次性濾筒，裝量100ml，高度約6.5cm。57、如果培養(yǎng)過程氧化層高度已超過藥典中要求的1/2高度，并發(fā)現(xiàn)其中長(zhǎng)菌，結(jié)果如何判定？若未長(zhǎng)菌，結(jié)果判定認(rèn)為無菌是否成立？此類問題應(yīng)該如何衡量？
答：如果培養(yǎng)過程氧化層高度已超過藥典中要求的1/2高度，并發(fā)現(xiàn)其中長(zhǎng)菌，可判斷為不合格； 若未長(zhǎng)菌，按藥典，結(jié)果判定認(rèn)為無菌應(yīng)不成立； 此類問題應(yīng)該照藥典執(zhí)行，培養(yǎng)后不超過1/2高度。
58、“無菌性檢查中每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶）”,這句話中的“5支（瓶）”是5支或5瓶，還是5支和5瓶？”
答：或
59、潔凈區(qū)與陽性實(shí)驗(yàn)室空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)如何分別設(shè)置？送風(fēng)分離，回風(fēng)分離，或兩者均分離？即2套空調(diào)系統(tǒng)？
答：2套系統(tǒng)互不相干。
60、十四烷酸異丙酯若經(jīng)驗(yàn)證后，不影響陽性菌生長(zhǎng)，可否濕熱滅菌？答：濕熱滅菌的水蒸氣可能會(huì)影響十四烷酸異丙酯的性能，建議按藥典。
61、沖洗液的濾清，加入不渾濁，是否可不用過濾？
答：可
62、無菌檢查時(shí)，陽性對(duì)照的接種與培養(yǎng)是否也必須和供試品培養(yǎng)同一天進(jìn)行？
答：應(yīng)同步操作。
63、使用的消毒劑應(yīng)無菌，比如購買的新潔而滅要用無菌的4.5微米濾膜過濾再用嗎？
答：如用在關(guān)鍵地方，建議過濾。
64、產(chǎn)品穩(wěn)定性考察，有無菌檢查項(xiàng)目，請(qǐng)問留樣產(chǎn)品的無菌檢查的數(shù)量和常規(guī)檢查的數(shù)量要一樣嗎？如果是，留樣量就會(huì)相當(dāng)大，有的藥品比較貴重，這樣會(huì)造成企業(yè)較大的損失.
答：無菌檢查的數(shù)量和常規(guī)檢查的數(shù)量應(yīng)一樣。 按藥典穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則附表，該做就應(yīng)做，但若情況特殊，或許可減低檢驗(yàn)頻次，但如此一來，可能一些藥品注冊(cè)審評(píng)專家或GMP檢查員會(huì)有不同意見。穩(wěn)定性試驗(yàn)的無菌檢查很大程度是在考察包裝。
65、 做培養(yǎng)基適用性與方法驗(yàn)證時(shí)，若加菌量為100~120cfu＞100cfu，是否需要重新做驗(yàn)證？
答：要。
66、 藥典只是提供了化藥中干擾物的中和劑方法，能否提供一些中成藥的除菌方法？
答：無
67、潔凈區(qū)污染霉菌怎么處理？
答：可嘗試甲醛熏蒸
68、潔凈區(qū)有霉菌生長(zhǎng)，要怎么凈化環(huán)境？注：我們用75%的乙醇抹洗全部空間，然后開臭氧半小時(shí)，但是檢測(cè)后還是發(fā)現(xiàn)有霉菌，老師是不是還有更好的方法？
答：可嘗試甲醛熏蒸
69、老師說的酒精棉過一段時(shí)間會(huì)生長(zhǎng)細(xì)菌，請(qǐng)問酒精棉保存期多久？
答：未考察，我們使用期一般不超過一周。
70、酒精棉怎樣取樣進(jìn)行微生物檢查？
答：請(qǐng)自行設(shè)計(jì)
71、酒精棉有規(guī)定超過多少的菌數(shù)不能再用？
答：無規(guī)定。
72、廣州環(huán)凱有凍干菌粉賣，是否可以在其單位購買？
答：建議向中檢所購買。
73、請(qǐng)問藥典說“當(dāng)產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變時(shí)，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)方法重新驗(yàn)證”，如何理解“原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變”
答：比如，將沖洗量500ml改為300ml，等等。
74、靈敏度檢查：改良馬丁和硫乙醇酸性流體培養(yǎng)基都要做6種菌株嗎？
答：硫乙醇：4種，為金葡、銅綠、枯草、生孢； 馬?。?種，為百念、黑曲。
75、清潔后的潔具需用微生物純化水洗滌？
答：清潔后的潔具需用純化水洗滌。
76、無菌：陽性對(duì)照培養(yǎng)48~72小時(shí)就可以滅活了嗎？不用跟供試品培養(yǎng)14天嗎？
答：是的
77、供試品處理時(shí)，需加入適量的聚山梨酯80，聚山梨酯80需要滅菌嗎？方法如何？
答：需滅菌，可采用濕熱滅菌。
78、含0.05%（v∕v）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液如何配制？答：可直接用聚山梨酯80配制，或先配制聚山梨酯80的濃溶液，然后取濃溶液作進(jìn)一步配制。
79、如何證明“表面活性劑，中和劑或滅活劑使用應(yīng)有效性及對(duì)微生物無毒性”？
答：自行設(shè)計(jì)
80、抗生素效價(jià)室放在潔凈室里面是否合適？
答：應(yīng)與潔凈區(qū)分開。
81、最后滅菌產(chǎn)品的原輔料是否需要做微生物限度檢查？
答；一般情況應(yīng)做。
82、薄膜過濾法若試驗(yàn)沖洗量1000ml陽性用量多少？
答：也1000ml。
83、無菌用培養(yǎng)基是否不用對(duì)照培養(yǎng)基？
答：是
84、無菌檢查法從開始制樣到加入培養(yǎng)基也不能超過1h嗎？
答：一般情況應(yīng)該如此。
85、薄膜過濾法濾膜若＞50mm，沖洗量是否需調(diào)整？如何調(diào)整？
答：建議按藥典規(guī)定，選用直徑約50mm的濾膜。如要調(diào)整，即重新驗(yàn)證。
86、陽性菌接種使用生物安全柜后，那接種室的空調(diào)系統(tǒng)能否與微生物限度檢查室共用？如果現(xiàn)在共用了，有什么方法能避免交叉污染？
答：請(qǐng)掌握原則，凈化系統(tǒng)應(yīng)分開。
87、怎么消毒在試驗(yàn)中要用的無菌溫度計(jì)？
答：我們沒有這方面的經(jīng)驗(yàn)。
88、發(fā)酵分裝容器要預(yù)先滅菌，請(qǐng)問分裝時(shí)是否有要求在無菌的環(huán)境下進(jìn)行，分裝后再進(jìn)行滅菌，程序是否復(fù)雜化？
答：我們不明白該問題，一般而言，既然容器要預(yù)先滅菌，分裝也應(yīng)無菌操作。
89、無菌檢查用的菌懸液是否必須用新鮮培養(yǎng)制備？用于制備菌懸液的培養(yǎng)物可否在25℃條件下連續(xù)使用一周？
答：請(qǐng)按藥典10版要求，否則，自己驗(yàn)證。
90、飲用水檢測(cè)中GB標(biāo)準(zhǔn)中“總大腸菌群檢出應(yīng)進(jìn)一步檢驗(yàn)大腸埃希菌或耐熱大腸菌群”，是否可以只做大腸埃希菌？
答：我們目前尚未開展水質(zhì)檢驗(yàn)。
2010版中國藥典培訓(xùn)回答（第4部分：菌種傳代與特定菌檢測(cè)）
廣東省藥檢所對(duì)《中國藥典》2010版微生物專題培訓(xùn)班的有關(guān)問題解答答案。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120415/3980531/
1.以第五代菌做陽性對(duì)照，實(shí)驗(yàn)過程中的接種按藥典應(yīng)該也算傳代，那是否算是第六代菌呢？答：依然算第五代(接種的菌株算第5代，培養(yǎng)后算第6代)
答：其實(shí)驗(yàn)結(jié)果是算哪一代菌的？答：見上題
2.藥典規(guī)定只能傳代五次，此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否有效？
答：有效
3.現(xiàn)在有無對(duì)照菌種可以購買？聯(lián)絡(luò)電話？
答：省藥檢所業(yè)務(wù)科銷售藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株，為第二代甘油凍存管，電話：020-81854392
4.菌種發(fā)放單應(yīng)包括什么信息？
答：根據(jù)自己工作的需要，大致包括：菌種名稱，編號(hào)，來源，接收日期，接收人等。
5.如何檢查黑曲霉孢子懸浮液孢子含量為50~100個(gè)／ml。銅綠假單胞菌單菌如果用甘油冷凍管，也是低溫，是否也會(huì)影響它的活性？應(yīng)如何保存？
答：可用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂來確定黑曲霉孢子懸浮液。銅綠假單胞菌應(yīng)使用最終甘油濃度為20%的甘油凍存管保存，保存在-30℃或更低溫度，則可保持其活性。若是斜面或營養(yǎng)肉湯，建議室溫保存。
6.工作菌株，25℃下可連續(xù)使用一周，這里的工作菌株是指原液還是制備好的菌懸液。為何工作菌株不低溫存放，而是25℃？
答：首先要說明，所有的操作應(yīng)按藥典要求來操作，這里的工作菌株指原液，工作菌株建議在2-8℃保存，但要注意的是，銅綠假單胞菌的工作菌液不能低溫保存，低溫會(huì)損傷其活性。由于筆誤，寫成了25℃，請(qǐng)更正為2-8℃。
7.簡(jiǎn)單方便的厭氧培養(yǎng)方案？
答：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基的話可考慮使用一次性厭氧袋。
8.甘油凍存管一定要－30℃嗎？0℃以下不可以嗎？
答：詳見《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2010版341頁。我們的甘油凍存管保存在-30℃。
8.三糖鐵斜面穿刺會(huì)斷層，這是為什么？
答：產(chǎn)氣菌產(chǎn)氣使培養(yǎng)基斷層，或培養(yǎng)基本身質(zhì)量問題。
9.第一代菌種可不可以作為工作菌株使用？
答：我們不這樣使用，因?yàn)閾?dān)心菌株沒有充分復(fù)壯，生化特性可能不典型。
10.制備菌懸液時(shí)，要使其在10~100cfu中，應(yīng)多注意的地方是什么？
答：制定標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程，減少不同實(shí)驗(yàn)者帶來的誤差，接種量、培養(yǎng)溫度和時(shí)間應(yīng)每次一致。
11.銅綠假單胞菌不宜放冰箱內(nèi)保管，但其營養(yǎng)肉湯液能否放在冰箱保管？
答：詳見《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2010版341頁。能否放冰箱可自行驗(yàn)證。
12.黑曲霉的存放期如何驗(yàn)證？
答：通過孢子懸液計(jì)數(shù)和菌落特征，進(jìn)行驗(yàn)證。
13.標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株必須進(jìn)行純度和特性確認(rèn)？還是在必要情況下才做？
答：詳見《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2010版341頁，我們?cè)谥苽錁?biāo)準(zhǔn)貯備菌液前進(jìn)行純度和特性確認(rèn)，最好在使用前再進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。
14.銅綠假單胞菌貯存溫度應(yīng)為多少度？
答：一般在10℃以上，甘油凍存管至少在-30℃以下。
15.制備工作菌種進(jìn)行菌種保藏中的保存期是否要進(jìn)行驗(yàn)證？
答：可參考2010年版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP），應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。
16.驗(yàn)證用菌株可否使用ATCC？
答：如果按中國藥典檢驗(yàn)的，用CMCC
17.菌種鑒定該如何做？
答：請(qǐng)參考講義內(nèi)容。
18.藥典菌懸液制備是要菌種的新鮮培養(yǎng)物接種至培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24h再進(jìn)行稀釋，制備菌懸液，可否直接使用未過期工作菌種進(jìn)行稀釋來制備菌懸液？
答：按藥典要求不行，如要使用，請(qǐng)自己驗(yàn)證。。
19.斜面低溫保藏法：每一次的菌種傳代都需要做菌種純度鑒定嗎？
答：建議制備斜面保存管前進(jìn)行菌種純度鑒定，以后的每次傳代視具體情況而定。
20.如何比較快速有效判斷菌液的濃度？除了可以用“比濁儀”參考，還有什么方法？
答：比濁儀只做輔助參考，還需通過平板計(jì)數(shù)來最后確認(rèn)菌液的濃度。
21.曾于中檢所中購買過黑曲霉的0代包子懸液，說明書上表示應(yīng)于-20℃中保存，可保存一年，對(duì)于此保存唯獨(dú)及效期，藥企可否同法保存自制的黑曲霉孢子懸液？是否要驗(yàn)證？如何驗(yàn)證？
答：黑曲霉孢子懸液制備請(qǐng)參照2010版藥典的相關(guān)內(nèi)容。關(guān)于驗(yàn)證在前面的問題中已經(jīng)回復(fù)。
22.菌種純度確認(rèn)，怎么確認(rèn)，需確認(rèn)哪些項(xiàng)目？
答：請(qǐng)參照2010版藥典的相關(guān)內(nèi)容。
23.細(xì)菌菌種接入營養(yǎng)肉湯中保存一周，這需要驗(yàn)證嗎？、
答：建議做驗(yàn)證。
24.菌種斜面最多能保存菌幾代？經(jīng)冰箱保存的斜面菌種是否需復(fù)蘇二次才能進(jìn)行菌懸液配制？
答：藥典規(guī)定，菌種傳代不應(yīng)超過5代。冰箱保存的斜面菌種復(fù)蘇后即可使用。
25.革蘭氏染色的時(shí)間一般多長(zhǎng)時(shí)間，染色時(shí)間長(zhǎng)了對(duì)結(jié)果有無影響？
答：詳見講義內(nèi)容，應(yīng)嚴(yán)格控制染色時(shí)間，否則對(duì)結(jié)果影響很大。
26.哥倫比亞血瓊脂平皿生長(zhǎng)的菌落，對(duì)氧化酶試驗(yàn)是否有影響？菌懸液的制備過程中，接種菌種新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，這個(gè)新鮮培養(yǎng)物怎么理解，冰箱保存斜面菌種是新鮮培養(yǎng)物嗎？
答：沒使用過哥倫比亞血瓊脂及相關(guān)實(shí)驗(yàn)。新鮮培養(yǎng)物指剛培養(yǎng)好的菌株，冰箱保存斜面菌種不算新鮮培養(yǎng)物。
27.菌種鑒定時(shí)，一定要根據(jù)藥典的所有試驗(yàn)做完，才能確認(rèn)是某種菌株嗎？可否省略一些試驗(yàn)？
答：請(qǐng)按藥典規(guī)定來進(jìn)行菌種鑒定，具體情況可能還要增加適宜的鑒定試驗(yàn)。
28.工作菌株可在25℃連續(xù)使用一周，是指同一代同一管的菌株嗎？還是說同一代不同管的菌株？
答：筆誤更正，同上一題。
29.若沒有比濁儀，用什么方法來確認(rèn)50~100cfu/ml？特別是孢子？
答：孢子計(jì)數(shù)建議通過平板計(jì)數(shù)的方法來確定濃度。
30.工作菌種是否可以使用后再次冷藏使用（斜面保藏法）？
答：請(qǐng)自行掌握。
31.大腸埃希菌鏡檢時(shí)，有時(shí)固定好的菌在染色過程中脫落，請(qǐng)問是什么原因引起這種情況？
答：首先，洗干凈撥片，挑菌注意不要太多，待菌固定好后再進(jìn)行染色。
32.生孢梭菌，菌落培養(yǎng)計(jì)數(shù)時(shí)一定要在厭氧條件下進(jìn)行嗎？
答：是
33.菌懸液怎樣在24h內(nèi)確定其菌落數(shù)？請(qǐng)講解細(xì)菌和真菌的方法.
答：平板計(jì)數(shù)方法。
34.生孢梭菌培養(yǎng)時(shí)，怎樣做才能使其在厭氧中培養(yǎng)？
答：詳見2010版藥典
35.菌種的純度鑒定包括哪些內(nèi)容？如果是跟省藥檢所買的3代菌是否就不用做純度或確認(rèn)試驗(yàn)？
答：省所現(xiàn)在銷售的是第二代的甘油冷凍管，嚴(yán)格來說，請(qǐng)做純度確認(rèn)。
36.為什么有時(shí)候細(xì)菌管會(huì)長(zhǎng)真菌，而真菌管也會(huì)長(zhǎng)細(xì)菌。
答：原因可能是多方面的，某些細(xì)菌適宜在真菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而某些真菌也能在細(xì)菌培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。比如2010版藥典無菌檢查法，兩種培養(yǎng)基的使用范圍已刪去，已不是絕對(duì)的細(xì)菌培養(yǎng)基或真菌培養(yǎng)基。
37.在做方法驗(yàn)證時(shí)，黑曲霉菌濃度大于20cfu/皿時(shí)，培養(yǎng)5天后菌落蔓延擴(kuò)散，無法各個(gè)區(qū)分，如何在藥典要求的50~100cfu和實(shí)際操作結(jié)果中找到平衡？因?yàn)榫鷿鈱?duì)回收率及操作RSD%影響很多.
答：培養(yǎng)48-72h后，菌落剛形成時(shí)，及時(shí)點(diǎn)計(jì)并做記號(hào)，然后每天觀察有無新的菌落長(zhǎng)出并計(jì)數(shù)。
38.標(biāo)準(zhǔn)菌黑曲霉在傳代前需要先接到改良馬丁培養(yǎng)基復(fù)蘇后，再傳代，如果需要，接到改良馬丁培養(yǎng)基后培養(yǎng)時(shí)間怎么定？
答：2010版藥典規(guī)定 ，黑曲霉傳代，培養(yǎng)時(shí)間為5~7天
39.有時(shí)候在玫瑰紅鈉瓊脂或營養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)有酵母菌，在酵母菌生長(zhǎng)的位置底部產(chǎn)生了一個(gè)氣泡狀的圓形，把底部的瓊脂都貢起來了，又或者表面沒有任何菌落，而瓊脂被貢起來，請(qǐng)問這種圓形氣泡是菌嗎？在計(jì)數(shù)時(shí)是否也把它算入酵母菌？
答：建議挑取氣泡內(nèi)含物接種至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，若能生長(zhǎng)，且為酵母菌的菌落形態(tài)，應(yīng)該可以將其算入酵母菌。
40.大腸生化實(shí)驗(yàn)中的靛基質(zhì)試驗(yàn)（I）項(xiàng)結(jié)果為“ ”或者“-”均不影響最終結(jié)果的判斷，請(qǐng)問該項(xiàng)的意義何在？是否可以取消？
答：反應(yīng)為 ，為典型大腸埃希氏菌，-為非典型大腸埃希菌。關(guān)系到最終判斷，都是必須的實(shí)驗(yàn)，不可取消。
41.生化檢查用的鑒定盒是否需要跟培養(yǎng)基一樣做適用性檢查？如果需要做，應(yīng)該如何進(jìn)行？
答：用陽性菌做一次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符即可。
42.銅綠假單胞菌用什么方法保存及更活處理方法？
答：建議采用甘油凍存管（終濃度為20%的甘油凍存管），-30℃（或更低溫度）保存。
43.工作菌種每代可保存多長(zhǎng)時(shí)間（斜面低溫保藏法）才傳下一代？
答：教科書上的保存時(shí)間為1-6個(gè)月。
44.工作菌株的使用記錄（時(shí)間、用途、使用者等）是否需要建立臺(tái)賬？
答：是
45.菌株的純度和特性要多久確認(rèn)一次，最短時(shí)間和最長(zhǎng)時(shí)間分別是多少？
答：做標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株之前務(wù)必要進(jìn)行鑒定，其它根據(jù)實(shí)際情況：如污染、活性下降、儲(chǔ)存條件發(fā)上改變等。
46.革蘭氏染色前，菌落是否要先純化（接到營養(yǎng)瓊脂斜面上）還是直接從選擇性培養(yǎng)基上挑起菌落直接染色？
答：要純化，從選擇性培養(yǎng)基挑取單個(gè)菌落，最好先接到營養(yǎng)瓊脂斜面后，再進(jìn)行染色。
47.真菌接至改良馬丁液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時(shí)間為多長(zhǎng)？（白色念珠菌、黑曲霉）答：見2010版藥典。
48.菌種鑒定一定要做到生化鑒定嗎？
答：要?？梢赃x擇傳統(tǒng)的生化試驗(yàn)鑒定，也可選擇鑒定儀或鑒定試劑條。請(qǐng)視自身情況而定。
49.是否可按10版藥典中抑制控制菌檢驗(yàn)判定方法進(jìn)行？比如金葡菌做甘露醇平板分離，革蘭染色，血漿凝固酶為陽性就可以了。
答：金葡這樣做可以。其他菌株視具體情況而選擇適宜的鑒定試驗(yàn)。
50.請(qǐng)介紹一下，有什么簡(jiǎn)便的方法滅菌甘油？
答：高壓濕熱滅菌法
51.黑曲霉孢子懸液貯存期驗(yàn)證怎么做?！?/p>
答：請(qǐng)參考前面該問題的答復(fù)。
52.銅綠假單胞菌瓊脂斜面變紅，是否會(huì)造成菌種變異？如何避免該情況出現(xiàn)？（本菌株于25℃保存）
答：出現(xiàn)這樣的情況建議對(duì)菌種純度進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)操作請(qǐng)注意防止污染。
53.銅綠假單胞菌菌懸液是否也可在2~8℃保存，24小時(shí)內(nèi)使用？
答：不建議，請(qǐng)自己驗(yàn)證。
54.是否一定要使用CMCC的菌株嗎？
答：藥典是這樣規(guī)定的。
55.假如使用ATCC的菌株代替CMCC的可以嗎？
答：請(qǐng)按藥典規(guī)定來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，若是藥品檢驗(yàn)，請(qǐng)用CMCC菌株。
56.可以用液氮保藏甘油冷凍管嗎？可以的話應(yīng)該怎么操作？
答：可以。具體操作不清楚。我們沒有液氮保存罐。
57.貴所有開展支原體檢查法這個(gè)實(shí)驗(yàn)嗎？
答：沒有
58.制備菌懸液的時(shí)候，培養(yǎng)物用的營養(yǎng)肉湯用量是多少？
答：沒有具體規(guī)定，請(qǐng)自行制定。
59.制備菌懸液的時(shí)候怎樣保證他是50cfu呢？具體說一下操作方法
答：自行摸索一套方法，固定下來，以后就按該方法做就可以了。
60.請(qǐng)問菌種斜面最好多長(zhǎng)時(shí)間轉(zhuǎn)接一次？
答：參考上一題。
61.20%甘油v∕v是用水還是用相應(yīng)培養(yǎng)基做稀釋？
答：用相應(yīng)的培養(yǎng)基。
62.驗(yàn)證或做培養(yǎng)基的適用性檢查時(shí)，若實(shí)際操作制得的菌懸液，經(jīng)測(cè)定計(jì)數(shù)后不在規(guī)定的范圍內(nèi)，如＞100cfu，是否應(yīng)判本次實(shí)驗(yàn)無效，應(yīng)重試？若試菌，真菌生長(zhǎng)較慢，不能短期內(nèi)預(yù)算菌數(shù)，如何解決？
答：第一個(gè)問題，請(qǐng)重試。第二個(gè)問題，請(qǐng)注意積累平時(shí)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)化操作，慢慢摸索稀釋的倍數(shù)。
63.有時(shí)候酵母菌在玫瑰紅鈉平板上不易觀察，是否可用孟加拉瓊脂培養(yǎng)基代替來作培養(yǎng)？
答：藥品檢驗(yàn)請(qǐng)嚴(yán)格按藥典規(guī)定，若是平時(shí)科研，應(yīng)該可以用孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基代替。
64.菌種的每一次傳代（如3代→4代→5代）都必須做菌種鑒定實(shí)驗(yàn)嗎？
答：視具體情況而定。
65.如何控制菌液的濃度為50～100cfu/ml？
答：見前面問題的回復(fù)。
66.菌種的傳代，營養(yǎng)肉湯或改良馬丁0.5ml～0.8ml復(fù)蘇凍干菌粉→直接涂布于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)箱→是第一代還是第二代？
答：凍干菌粉為第0代，若凍干菌粉未經(jīng)過培養(yǎng)，直接涂布到培養(yǎng)基上，為第1代。
67.請(qǐng)教一個(gè)有關(guān)微生物限度檢查的問題，在制備10～100cfu菌液時(shí)除了你說的比濁法，比較普遍的就是平板計(jì)數(shù)法，而其中用到的六種試驗(yàn)菌，細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂計(jì)數(shù)，霉菌用玫瑰紅鈉瓊脂平板計(jì)數(shù)，其它四種菌應(yīng)用何種培養(yǎng)基計(jì)數(shù)？
答：不知道此處所說的其他4種指的是什么菌。
68.只用平板計(jì)數(shù)，結(jié)果準(zhǔn)確嗎？還有沒有其他方法制備10～100cfu菌懸液？答：這是一個(gè)很好的課題，若感興趣，你們可以好好研究一下。
69.大腸埃希菌檢查中，MUG培養(yǎng)基配制后顯熒光是什么原因？
答：有可能試管玻璃材質(zhì)自發(fā)熒光，也可能清洗不干凈，或培養(yǎng)基本身質(zhì)量，比如有無發(fā)生污染等。
70.請(qǐng)問可用何種培養(yǎng)基或手段鑒定枯草芽孢桿菌？eg：大腸埃希菌用EMB，金黃色葡萄球菌用甘露醇
答：目前尚未有合適的選擇性培養(yǎng)來鑒定枯草芽孢桿菌，可選用API 或細(xì)菌鑒定儀等手段來鑒定。
71.請(qǐng)問：細(xì)菌鑒定儀有哪些用途？能夠鑒定沙門菌屬下的各種沙門菌么？怎樣應(yīng)用？
答：如有需要，可聯(lián)系梅里埃的技術(shù)支持人員：13503006367 霍工。他會(huì)詳細(xì)解答你想問的問題。
72.黑曲霉菌在2~8℃保存經(jīng)驗(yàn)證后能否延長(zhǎng)使用時(shí)間？
答：藥典規(guī)定在驗(yàn)證過的期限內(nèi)使用。
73菌種的保藏可否用液體石蠟保藏？與甘油冷凍保藏有何區(qū)別？
答：藥典未記載液體石蠟保藏法，部分參考書記載斜面保藏法或半固定保藏法可加滅菌石蠟覆蓋。
2010版中國藥典培訓(xùn)回答（第5部分：培養(yǎng)基抑制力）
廣東省藥檢所對(duì)《中國藥典》2010版微生物專題培訓(xùn)班的有關(guān)問題解答答案。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120415/3980531/
1．是否只是添加了抑菌劑的注射劑才需要做抑菌效力檢查？沒有添加的就不需要了，是嗎？
抑菌劑效力檢查法系用于測(cè)定滅菌、非滅菌制劑中抑菌劑的活性，以評(píng)價(jià)最終產(chǎn)品的抑菌效力，同時(shí)也可用于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)在制劑研發(fā)階段抑菌劑的確定。要求具有抗菌活性的制劑（參見制劑通則），不管是添加的抑菌劑，還是藥物本身具有抗菌活性，在藥物研發(fā)階段，均應(yīng)確認(rèn)其抗菌效力
2．抑菌效力實(shí)驗(yàn)中“菌數(shù)測(cè)定方法需經(jīng)驗(yàn)證”是指示品種方法驗(yàn)證時(shí)的方法還是需重新做驗(yàn)證？
抑菌試驗(yàn)所加的菌與品種微生物限度檢查法驗(yàn)證時(shí)所用的菌有所不同，這里的“菌數(shù)測(cè)定方法需經(jīng)驗(yàn)證”，是指樣品對(duì)試驗(yàn)時(shí)所加進(jìn)的菌，在經(jīng)樣品作用后的剩余的菌數(shù)。與品種的微生物限度檢查法的驗(yàn)證不同，所以必須重新驗(yàn)證。
3．培養(yǎng)基抑制能力檢查接菌量不少于10cfu，有無上限要求？若無，直接加菌的原液是否可以？
沒有上限要求。理論上可以。
4．對(duì)日化產(chǎn)品作細(xì)菌/真菌防腐挑戰(zhàn)，采用單一菌種10 -6細(xì)菌濃度，2~3種真菌10 -5進(jìn)行挑戰(zhàn)是否合理？
根據(jù)產(chǎn)品的性能，功效以及所含防腐劑的最小抑菌濃度確定。
5．目前我國化妝品防腐挑戰(zhàn)與美國CTFA的方法區(qū)別在哪里？哪一種方法更為嚴(yán)格？
CTFA的方法初始的霉菌和細(xì)菌的接種量分別為10000cfu/g（ml）和1000000cfu/g（ml）（CFU為菌落單位），要求在第7天時(shí)霉菌降低90%，細(xì)菌降低99.9%，并且在28天內(nèi)菌數(shù)持續(xù)下降。
國內(nèi)參照CTFA加菌防腐挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，初始接種細(xì)菌量1000000cfu/g（mL）
（1）第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌＞1000cfu/g（mL）該樣品不能通過微生物攻擊的挑戰(zhàn)試驗(yàn)，表明樣品的防腐體系不能有效地志到抑制微生物的作用，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用中很容易受到微生物的污染。
（2）第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌在100 cfu/g-1000 cfu/g（mL），該樣品有條件地通過挑戰(zhàn)試驗(yàn)，即當(dāng)產(chǎn)品中蛋白質(zhì)或其他動(dòng)植物材料成分不是特別高，同時(shí)生產(chǎn)的衛(wèi)生環(huán)境符合要求，包裝物不易發(fā)生二次污染時(shí)，該防霉體系可以使用，否則不能。
（3）第28天時(shí)，樣品中含細(xì)菌或霉菌在10 cfu/g-100 cfu/g（mL），表明該樣品的防腐體系對(duì)微生物有較強(qiáng)的抑殺效果，通過挑戰(zhàn)試驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)不容易受到微生物污染。
（4）從第7天起，樣品中的細(xì)菌或霉菌＜10 cfu/g（mL），說明該樣品的防腐體系對(duì)微生物有特強(qiáng)的抑殺作用，通過挑戰(zhàn)試驗(yàn)，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用時(shí)很不容易被微生物污染。
6． 對(duì)于密封性較好的產(chǎn)品，如噴霧劑瓶裝，用何種微生物檢測(cè)方法更能較客觀地模擬實(shí)際使用過程中微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)？
推薦采用薄膜過濾法按該產(chǎn)品日常用法在不同規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取樣檢測(cè)。
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